მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიით (HPLC) მუშაობისას, კარგი დაკალიბრება აბსოლუტურად აუცილებელია საიმედო, ხარისხიანი შედეგების უზრუნველსაყოფად. HPLC ინსტრუმენტის სწორი კალიბრაცია იწყება შესაფერისი კალიბრაციის სტანდარტის შემუშავებით. უმეტეს შემთხვევებში, დაკალიბრება სინამდვილეში მოითხოვს კონცენტრაციის გაზრდის სტანდარტების სერიას, რათა წარმოიქმნას დაკალიბრების მრუდი. ეს არის გრაფიკული ხაზი და მასთან დაკავშირებული განტოლება, რომელიც აღწერს დამოკიდებულებას ტესტირებადი ქიმიური ნივთიერების კონცენტრაციასა და HPLC დეტექტორის რეაქციას შორის.
განსაზღვრეთ ქიმიური ნივთიერება, რომლის ტესტირებაც გსურთ HPLC ("ანალიზის") გამოყენებაზე. მაგალითად, თქვენ მოისურვებთ შეამოწმოთ გამაგრილებელი სასმელების სერია ფრუქტოზას შემცველობაზე, ამ შემთხვევაში ფრუქტოზა იქნება ანალიზატორი.
მიიღეთ სიწმინდის ანალიზური ქიმიური ნივთიერების რაოდენობა. ჩვეულებრივ, სისუფთავე უნდა იყოს 99% -ზე მეტი და ანალიტი უნდა შეიძინოთ რეპუტაციის მქონე ქიმიური კომპანიისგან. მაგალითად, ფრუქტოზის შემთხვევაში, თქვენ შეიძენდით სუფთა ფრუქტოზას ქიმიკატების გამყიდველისგან და არა სასურსათო მაღაზიიდან.
განსაზღვრეთ ანალიზის მაქსიმალური და მინიმალური მოსალოდნელი კონცენტრაციები იმ ნიმუშებში, რომელთა შემოწმებას აპირებთ HPLC- ზე. გამაგრილებელი სასმელების შემთხვევაში, თქვენ შეისწავლით სასმელების ეტიკეტებს და განსაზღვრავთ ფრუქტოზას ყველაზე დაბალ და მაღალ შემცველობას იმ სასმელებს შორის, რომლებსაც შეამოწმებთ. გაითვალისწინეთ, რომ საწყისი ნიმუში (გამაგრილებელი სასმელი) შეიძლება განზავდეს ან სხვაგვარად მანიპულირდეს ანალიზისთვის მომზადების დროს (დამოკიდებულია HPLC მეთოდის გამოყენებაზე) და ასე რომ, ანალიზის კონცენტრაცია სინამდვილეში შეყვანილ HPLC ნიმუშებში შეიძლება იყოს განახლდა. გასათვალისწინებელია ანალიზის კონცენტრაცია ნიმუშებში HPLC– ზე.
განსაზღვრეთ გამხსნელი, რომელშიც დაითხოვთ თქვენს ანალიზს, რომ დადგინდეს დაკალიბრების სტანდარტები. ამ გამხსნელს უნდა ჰქონდეს საშუალება ანალიზს სწორად დაითხოვოს კონცენტრაციის შედარებით ფართო დიაპაზონში (როგორც მინიმუმ იმ ნიმუშებში, რომელთა გამოცდას აპირებთ). ასევე, ეს გამხსნელი იდეალური უნდა იყოს "მობილური ფაზის" მსგავსი: გამხსნელი, რომელიც გამოიყენება HPLC ინსტრუმენტის საშუალებით ნიმუშების გადასატანად.
გამოთვალეთ ანალიზის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა ანალიზატორის "საფონდო სტანდარტის" გამოსავლის მისაღებად. ეს გვხვდება საფონდო სტანდარტის საჭირო კონცენტრაციის გამრავლებით სასურველ მოცულობაზე. ამ ხსნარში ანალიზის კონცენტრაცია უნდა იყოს მინიმუმ 10% -ით მაღალი ვიდრე მოსალოდნელი სინჯის კონცენტრაციაზე. თუ გამაგრილებელი სასმელის ნიმუშში ფრუქტოზას მოსალოდნელი მაღალი კონცენტრაციაა 8 გრამი / 100 მილილიტრი, მაშინ მარაგის სტანდარტი შეიძლება მივიღოთ 10 გრამი ფრუქტოზას / 100 მილილიტრის კონცენტრაციაზე. გონივრული მოცულობა 500 მილილიტრია, ამიტომ 8/100 მლ x 500 მლ = 40 გრამი ფრუქტოზა იქნება საჭირო.
საჭირო რაოდენობის ანალიზს შეაფასეთ სიზუსტის შესაფერისი დონის შესაბამისად. ხშირად წონის მნიშვნელობა გრამებში ზუსტად ერთი ან ორი ათობითი ადგილისთვის არის შესაფერისი, მაგრამ ზოგიერთი მეთოდისთვის შეიძლება მეტი სიზუსტის საჭიროება.
შეწონილი ანალიტი გადაიტანეთ საჭირო მოცულობის მოცულურ კოლბაში და კოლბაში შევსების ნიშანს დაუმატეთ სასურველი გამხსნელი. მოცულობითი კოლბის გამოყენება (მაგალითად, არა დამთავრებული ჭიქა) ზრდის მარაგის სტანდარტული კონცენტრაციის მნიშვნელობის სიზუსტეს. დარწმუნდით, რომ მთელი ანალიტიკოსი გადავიდა კოლბაში; საჭიროების შემთხვევაში გამოიყენეთ რამდენიმე გამხსნელი მის გასარეცხად.
გააკეთეთ საფონდო სტანდარტის სხვადასხვა განზავების სერია მარაგის სტანდარტის ცნობილი მოცულობების მოცულობით კოლბებში გადატანის გზით, პიპეტების გამოყენებით ზუსტი გადასაცემად, შემდეგ კი გამხსნელის დამატებით. ყველაზე დაბალი სტანდარტული კონცენტრაცია უნდა იყოს ყველაზე დაბალი მოსალოდნელი ნიმუშის ანალიზისთვის. გამაგრილებელი სასმელის მაგალითზე, თუ ნიმუშში ფრუქტოზას მოსალოდნელი დაბალი კონცენტრაციაა 2 გრამი / 100 მლ, მაშინ შეიძლება გაკეთდეს 1 გრამი / 100 მლ სტანდარტი. ეს მოხდება მარაგის სტანდარტის ათჯერ განზავებით. სტანდარტული სერია უნდა მოიცავდეს სულ 5 ან 6 კონცენტრაციას, ამიტომ საჭიროა დამატებითი განზავებები 3, 5 და 8 გრამი ფრუქტოზა / მლ სტანდარტების შესაქმნელად. ახლა თქვენ გაქვთ სტანდარტული გადაწყვეტილებების სერია, რომლის საშუალებითაც შეგიძლიათ HPLC დაკალიბრება.