Il tuo insegnante ti consegna un campione di batteri e ti chiede: quanti microrganismi vitali ci sono in questo campione? Cosa significa questo e come lo capisci? Un metodo è trovare il numero di unità formanti colonie(CFU).
Cosa sono i CFU?
Le CFU si riferiscono al numero di singole colonie di qualsiasi microrganismo che crescono su una piastra di terreno. Questo valore a sua volta rappresenta il numero di batteri in grado di replicarsi quando hanno formato colonie sulla piastra. Esiste una formula CFU che prevede il campionamento.
Come si trovano i CFU?
Contare il numero di batteri in un campione liquido è molto difficile. Ce ne sono troppi e sono troppo piccoli. Inoltre, alcuni di loro possono essere morti e altri vivi, e quelli morti non dovrebbero contare nel totale. Ti interessa solo praticabile batteri o batteri che possono replicarsi. Quindi, come puoi capire quanti batteri hai?
Allo stesso modo in cui puoi prendere un sondaggio di 1.000 persone e applicarlo a 10.000 persone per capire come potrebbero pensare a un determinato argomento. Puoi provare a prendere una piccola parte del tuo campione originale, capire quanti batteri ci sono dentro quella parte, e poi calcola per approssimare quanti ce ne sarebbero stati nell'originale campione.
Utilizzo delle diluizioni per trovare CFU
La procedura per trovare le CFU di un dato campione prevede la prima diluizione di quel campione. Le diluizioni vengono quindi piastrate su piastre con il mezzo di crescita corretto. Le diluizioni multiple sono spesso una buona idea poiché il campione originale può essere molto concentrato.
Dopo aver permesso ai batteri di crescere sulle piastre per un determinato periodo di tempo, singole colonie sono contati su un piatto. Se il campione era troppo concentrato, al posto delle singole colonie vedrai un'ampia area ricoperta di crescita batterica chiamata a prato. Ciò significa che dovresti diluire ulteriormente il tuo campione e provare a crescere di nuovo in modo da poter vedere le singole colonie.
Poiché le singole colonie provengono da un singolo batterio che si è replicato molte volte, solo queste contano per le CFU.
Procedura Sperimentale per Reperimento CFU
Un esempio di utilizzo delle diluizioni per fare un calcolo CFU potrebbe essere il seguente: in primo luogo, dal campione iniziale che il tuo insegnante ti dà, prendi 1 ml e lo piazzi. Il giorno dopo vedi che c'è un prato di batteri. Questo significa che non puoi contare il numero di CFU. Il prossimo passo è fare alcune diluizioni.
Per prima cosa, prendi 1 ml di campione e diluiscilo in 9 ml di terreno liquido. Poiché la diluizione è costituita da una parte di campione per nove parti di diluente, si parla di diluizione 1:10. Quindi, prendi 1 ml della diluizione 1:10 e aggiungila a 9 ml di terreno liquido. Questa diluizione è una diluizione 1:100. Infine si effettua una diluizione 1:1.000 prendendo 1 ml della diluizione 1:100 e aggiungendo 9 ml di terreno liquido. Per ogni diluizione, ora hai 10 ml di coltura batterica diluita.
Al termine delle diluizioni, si mettono su piastre 0,5 mL delle diluizioni. Assicurarsi di etichettare le piastre con cui è stata placcata la diluizione.
Il giorno dopo torni e vedi che tutte le piastre hanno alcune colonie individuali su di esse. Vuoi scegliere un piatto tra 30 e 300 colonie. Vedi che la piastra di diluizione 1: 1.000 ha circa 10 colonie, quindi significa che hai diluito eccessivamente il campione. Quella targa non servirà a trovare CFU.
La piastra di diluizione 1:10 ha molte colonie, forse più di 300. In tal caso puoi passare alla lastra 1:100. Conti le colonie su questo piatto e scopri che ha 179 colonie. Ciò significa che 0,5 mL della diluizione 1:100 contengono 179 CFU. Ma per quanto riguarda il campione originale?
Cos'è il calcolo CFU?
Ora che hai alcuni dati, puoi fare il calcolo CFU nel campione originale.
1. Prendi la quantità che hai placcato (0,5 ml) e moltiplicala per il fattore di diluizione (0,01) per ottenere 0,005. È necessario eseguire questa operazione per trovare il fattore di diluizione che ha prodotto il conteggio delle CFU. Qui, mezzo millilitro della diluizione 1:100 ha permesso di contare CFU.
2. Dividere le CFU dalla diluizione (179) per il risultato del passaggio 1 (0,005) per ottenere 35.800 CFU.
Ciò significa che l'originale 1 ml di campione che è stato diluito contiene 35.800 CFU. Un altro modo per dirlo è dire che il campione originale ha 35.800 CFU/mL.
CFU è un ottimo strumento per scoprire quanti batteri, funghi o microrganismi ci sono in un dato campione. Il metodo di placcatura qui descritto è particolarmente utile per campioni o organismi molto concentrati che non crescono bene nella coltura liquida.
