Ahli kimia menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi, atau HPLC, untuk memisahkan campuran senyawa. Secara umum, metode ini terdiri dari menyuntikkan sampel ke dalam kolom di mana ia bercampur dengan satu atau lebih pelarut. Senyawa yang berbeda menyerap, atau "menempel", ke kolom dengan derajat yang berbeda; dan saat pelarut mendorong senyawa melalui kolom, salah satu komponen campuran akan keluar dari kolom terlebih dahulu. Instrumen mendeteksi senyawa saat mereka keluar dari kolom dan menghasilkan kromatogram yang terdiri dari plot dengan waktu retensi pada sumbu x dan intensitas sinyal dari detektor pada sumbu y. Saat senyawa keluar dari kolom, mereka menghasilkan "puncak" dalam kromatogram. Secara umum, semakin jauh dan semakin sempit puncak dalam kromatogram, semakin tinggi resolusinya. Para ilmuwan menganggap resolusi 1,0 atau lebih tinggi untuk mewakili pemisahan yang memadai.
Ukur lebar dua puncak yang berdekatan dalam kromatogram dengan mencatat di mana nilai sumbu x berada di dasar setiap puncak. Sumbu x mewakili waktu retensi, biasanya diukur dalam detik. Jadi, jika puncak dimulai pada 15,1 detik dan berakhir pada 18,5 detik, lebarnya adalah (18,5 - 15,1) = 3,4 detik.
Tentukan waktu retensi dengan mencatat waktu, yaitu lokasi pada sumbu x, yang sesuai dengan lokasi maksimum puncak. Nilai ini biasanya sekitar setengah jalan antara dua nilai yang digunakan untuk menghitung lebar pada langkah 1. Contoh yang diberikan pada langkah 1, misalnya, akan menunjukkan maksimum sekitar 16,8 detik.
Hitung resolusi, R, antara dua puncak dengan:
R=\frac{RT_1-RT_2}{0.5(W_1+W_2)}
dimana RT1 dan RT2 mewakili waktu retensi puncak 1 dan 2, dan W1 dan W2 mewakili lebar puncak yang diambil pada dasarnya. Melanjutkan contoh dari langkah 2 dan 3, satu puncak menunjukkan waktu retensi 16,8 detik dan lebar 3,4 detik. Jika puncak kedua menunjukkan waktu retensi 21,4 detik dengan lebar 3,6 detik, maka resolusinya adalah:
R=\frac{21.4-16,8}{0.5(3.4+3.6)}=1.3
Hal yang Anda Butuhkan
- kromatogram HPLC
- Kalkulator
