Para ilmuwan menggunakan flow cytometry untuk membedakan antara berbagai jenis sel atau organisme mikroskopis. Ini adalah alat yang digunakan dalam banyak aplikasi seperti diagnostik medis atau patologi forensik. Sementara teknik eksperimental ini cukup mudah dilakukan, analisis data kompleks yang dihasilkan oleh flow cytometer lebih sulit karena beberapa faktor eksperimental dan/atau cytometer parameter. Oleh karena itu, data sitometrik harus divisualisasikan dan dianalisis menggunakan program profesional canggih seperti CELLQuest atau FlowJo. Keakraban dengan teknik flow cytometry, mesin dan perangkat lunak diperlukan untuk memahami hasil yang dihasilkan oleh ini eksperimen.
Perjelas tujuan eksperimen dengan bertanya, "Apa pertanyaan atau hipotesis yang sedang diselidiki?" Ini akan menjadi diperlukan untuk menyesuaikan hasil mentah ke format dan pengaturan yang sesuai untuk analisis lebih lanjut menggunakan sitometri statistik perangkat lunak. Buat perubahan apa pun yang diperlukan agar data ditampilkan dengan pengaturan yang relevan (misalnya sel positif, gerbang negatif, intensitas fluoresensi, populasi sel, dll.).
Temukan gerbang. Sel-sel dapat dikelompokkan atau hanya diamati berkerumun bersama-sama pada plot kepadatan atau diagram kontur. Kelompok-kelompok sering terpisah tergantung pada identitas mereka. Jika satu kelompok terwarnai dengan sangat kuat untuk penanda atau antibodi tertentu, disimpulkan bahwa anggota kelompok itu semuanya memiliki identitas tipe sel tertentu, yang mengekspresikan penanda itu. Adalah umum untuk menemukan sel-sel yang positif untuk lebih dari satu penanda ini, dan sel-sel ini biasanya merupakan perantara dan dilambangkan sebagai "positif ganda".
Lihat grafik sebar. Cara kelompok sel menyebar dalam plot pencar merupakan indikasi ukuran sel. Sel dengan hamburan sangat besar atau tinggi biasanya sel besar; namun, mereka mungkin besar hanya karena mengandung proporsi sitoplasma yang tinggi, atau mungkin tinggi karena memiliki nukleus yang sangat besar. Tergantung pada biologi yang sedang diselidiki, ini tentu saja akan sangat bervariasi antar eksperimen.
Lihat angka. Sesuaikan plot untuk menampilkan parameter yang berbeda pada satu sumbu (biasanya sumbu X) sambil tetap menghitung pada sumbu Y. Ini menunjukkan proporsi populasi sampel yang positif untuk parameter tertentu, sebagai puncak biasanya akan diamati dalam sampel bernoda positif, yang akan absen dari kontrol negatif negative Sampel.
Lihatlah histogram multi-parameter. Dengan menyesuaikan sumbu X dan sumbu Y untuk masing-masing mewakili parameter berbeda yang that diselidiki selama percobaan, adalah mungkin untuk mendapatkan pemahaman yang lebih dalam tentang properti dari sampel. Misalnya, dengan mengatur sumbu X ke fluoresensi merah dan sumbu Y ke fluoresensi hijau, gerbang gaya kuadran dapat dihitung untuk sampel untuk menunjukkan empat wilayah kuadran di mana sel-sel hadir dan diwarnai untuk fluoresensi merah atau hijau, keduanya warna, atau tidak sama sekali semua. Hal ini memungkinkan sampel heterogen untuk dibagi menjadi bagian-bagian komponennya dan setiap entitas yang tumpang tindih untuk divisualisasikan serta dikuantifikasi.
Referensi
- “Analisis Data Aliran Sitometri”; Susan Sharrow; 1991
- “Flow cytometry: instrumentasi dan analisis data”; Marvin Van Dila; 1985
- "Protokol aliran cytometry"; Teresa dan Robert Hawley; 2004
tentang Penulis
Palmer Owyoung meraih gelar Master of Arts dalam bisnis internasional dari University of California di San Diego dan a Bachelor of Arts dalam sosiologi dari University of California di Santa Barbara dan merupakan molekul terlatih ahli biologi. Ia menjadi penulis lepas sejak tahun 2006. Selain menulis, ia adalah pedagang Forex dan pemasar Internet penuh waktu.
Kredit Foto
Polka Dot RF/Polka Dot/Getty Images