Kaldu nutrisi cair digunakan untuk kultur bakteri seperti Escherichia coli. Resep kaldu ini bervariasi tergantung pada spesies bakteri dan adanya modifikasi genetik, misalnya resistensi antibiotik. Kaldu dapat dipadatkan dengan menambahkan agar, yang memungkinkan bakteri untuk membentuk koloni yang berbeda, sedangkan dalam kultur cair mereka hanya menyebar ke seluruh volume. Ini adalah teknik dasar tetapi penting untuk metode lanjutan seperti kloning gen atau uji mikrobiologis. Artikel ini mengasumsikan bahwa galur Escherichia coli laboratorium standar dibiakkan pada cawan agar (atau cawan petri) Luria broth (LB).
Timbang 10 gram tripton tingkat bakteri, 5 gram ekstrak ragi, 5 gram natrium klorida, 15 gram agar atau agarosa, dan 1 mililiter natrium hidroksida 1N. Campur ini dengan volume air steril suling dan autoklaf sampai 1 liter media diperoleh. Autoklaf media dalam botol atau termos yang tertutup rapat selama 25 menit. Biarkan dingin hingga kira-kira 50 derajat Celcius sebelum menambahkan reagen yang akan dihancurkan pada panas tinggi, seperti antibiotik atau suplemen nutrisi lainnya.
Biarkan media yang diautoklaf menjadi dingin hingga 50 derajat Celcius dan tidak lebih rendah dari 45 derajat Celcius, karena agar-agar akan mengeras dalam wadahnya sebelum dapat dituang. Siapkan cawan petri steril dan tuang secukupnya untuk menutupi seluruh luas permukaan cawan dan sekurang-kurangnya setengah dari kedalamannya. Hindari mengisi piring terlalu banyak dan sebaiknya jangan biarkan agar-agar menyentuh tepi atas piring. Biarkan pelat mengeras di lingkungan yang steril (misalnya di bawah tudung aliran laminar) dengan membiarkan tutupnya terbuka dan ke sudut tudung.
Keringkan piring. Meskipun cawan dapat digunakan segera setelah mengeras, akan ada sedikit uap air pada permukaan agar, yang akan mencegah koloni bakteri menempel dengan baik. Oleh karena itu, yang terbaik adalah mengeringkan piring sebelum mengoleskan bakteri apa pun, misalnya dengan membiarkannya di suhu kamar selama beberapa hari atau selama setengah jam di bawah tudung aliran laminar atau dalam suhu 37 derajat Celcius inkubator.
Simpan piring. Piring kering harus ditumpuk terbalik (terbalik) pada tutupnya dan dikembalikan ke aslinya kemasan, direkatkan tertutup dan dibungkus dengan kertas timah untuk melindungi dari cahaya atau di tempat yang sesuai wadah. Selalu tulis tanggal pembuatan di piring dan hindari penggunaan jika piring lebih dari 2 bulan.
Referensi
- "Protokol saat ini dalam biologi molekuler"; Karen Elbing dan Roger Brent; 2002
Tips
- Lakukan sebanyak mungkin langkah di atas (sebaiknya semua) dalam lingkungan yang steril (misalnya di bawah nyala api terbuka, atau tudung aliran laminar) untuk menghentikan kontaminan bakteri di udara masuk dan tumbuh di media.
tentang Penulis
Palmer Owyoung meraih gelar Master of Arts dalam bisnis internasional dari University of California di San Diego dan a Bachelor of Arts dalam sosiologi dari University of California di Santa Barbara dan merupakan molekul terlatih ahli biologi. Ia menjadi penulis lepas sejak tahun 2006. Selain menulis, ia adalah pedagang Forex dan pemasar Internet penuh waktu.
Kredit Foto
Jupiterimages/Comstock/Getty Images