Kloning TA adalah metode sederhana dan nyaman untuk produk reaksi berantai polimerase (PCR) subkloning. "TA" adalah kependekan dari "timin" dan "adenin." Teknik kloning ini memanfaatkan kemampuan timin untuk berhibridisasi menjadi adenin dengan adanya ligase. Enzim restriksi tidak digunakan, tidak seperti metode subkloning tradisional. Sebaliknya, produk PCR diamplifikasi menggunakan enzim Taq polimerase.
metode
Metode kloning TA menggunakan aktivitas terminal transferase dari asam deoksiribonukleat tertentu yang menggantung ke setiap ujung produk PCR.
Sebuah vektor kloning linier dengan satu, tiga prime-T (3'-T) overhang disebut vektor-T digunakan untuk mengkloning produk PCR ini menjadi vektor plasmid. Produk PCR dicampur dengan vektor ini dalam proporsi yang tinggi.
DNA ligase (T4 ligase) ditambahkan ke dalam campuran, yang memungkinkan kedua produk untuk berhibridisasi dan bergabung.
Keuntungan dan kerugian
Kloning TA adalah metode yang mudah untuk mensubklon produk PCR dalam vektor linier, dan ini jauh lebih sederhana dan lebih cepat daripada metode subkloning tradisional. Karena metode ini tidak menggunakan enzim restriksi, produk tanpa situs enzim restriksi dapat dikloning.
Kerugiannya adalah kit kloning TA sangat mahal dan, karenanya, penggunaannya terbatas. Selain itu, tidak ada kloning terarah; jadi kemungkinan kloning dalam arah yang berlawanan lebih besar.
Kit Kloning TA
Beberapa produsen menjual kit kloning TA. Beberapa adalah Invitrogen, QIAGEN dan Premier Biosoft.