Cara Menghitung CFU Dari Pengenceran

Guru Anda memberi Anda sampel bakteri dan bertanya kepada Anda: Berapa banyak mikroorganisme yang hidup dalam sampel ini? Apa artinya ini, dan bagaimana Anda mengetahuinya? Salah satu caranya adalah dengan mencari banyaknya unit pembentuk koloni(CFU).

CFU mengacu pada jumlah koloni individu dari setiap mikroorganisme yang tumbuh di piring media. Nilai ini pada gilirannya mewakili jumlah bakteri yang mampu bereplikasi karena mereka telah membentuk koloni di piring. Ada rumus CFU yang melibatkan pengambilan sampel.

Menghitung jumlah bakteri dalam sampel cairan sangat sulit. Ada terlalu banyak dari mereka, dan mereka terlalu kecil. Selain itu, beberapa dari mereka mungkin mati dan yang lain hidup, dan yang mati tidak boleh dihitung total. Anda hanya tertarik pada giat bakteri, atau bakteri yang dapat bereplikasi. Jadi bagaimana Anda bisa mengetahui berapa banyak bakteri yang Anda miliki?

Dengan cara yang sama Anda dapat mengambil jajak pendapat dari 1.000 orang dan menerapkannya pada 10.000 orang untuk mengetahui bagaimana pendapat mereka tentang subjek tertentu. Anda dapat mencoba dan mengambil sebagian kecil dari sampel asli Anda, mencari tahu berapa banyak bakteri di dalamnya bagian itu, dan kemudian menghitung untuk memperkirakan berapa banyak yang mungkin ada di aslinya Sampel.

Prosedur untuk menemukan CFU dari sampel yang diberikan melibatkan pengenceran pertama sampel itu. Pengenceran kemudian dilapisi ke piring dengan media pertumbuhan yang benar. Pengenceran ganda sering kali merupakan ide yang baik karena sampel asli bisa sangat pekat.

Setelah membiarkan bakteri tumbuh di piring untuk waktu tertentu, koloni individu dihitung di piring. Jika sampel terlalu pekat maka alih-alih koloni individu Anda akan melihat area yang luas ditutupi dengan pertumbuhan bakteri yang disebut a halaman rumput. Ini berarti Anda harus lebih mengencerkan sampel Anda dan mencoba menumbuhkan lagi sehingga Anda dapat melihat koloni individu.

Karena koloni individu berasal dari bakteri tunggal yang menggandakan dirinya berkali-kali, hanya ini yang diperhitungkan dalam CFU.

Contoh penggunaan pengenceran untuk melakukan perhitungan CFU dapat dilakukan sebagai berikut: Pertama, dari sampel awal yang diberikan guru Anda, Anda mengambil 1 mL dan melapisinya. Hari berikutnya Anda melihat bahwa ada rumput bakteri. Ini berarti Anda tidak dapat menghitung jumlah CFU. Langkah selanjutnya adalah membuat beberapa pengenceran.

Pertama, Anda mengambil 1 mL sampel dan encerkan ke dalam 9 mL media cair. Karena pengenceran adalah satu bagian sampel untuk sembilan bagian pengencer, ini disebut sebagai pengenceran 1:10. Kemudian, Anda mengambil 1 mL pengenceran 1:10 dan menambahkannya ke 9 mL media cair. Pengenceran ini adalah pengenceran 1:100. Terakhir Anda membuat pengenceran 1:1.000 dengan mengambil 1 mL pengenceran 1:100 dan menambahkan 9 mL media cair. Untuk setiap pengenceran, Anda sekarang memiliki 10 mL kultur bakteri yang diencerkan.

Pengenceran selesai, Anda menuangkan 0,5 mL pengenceran ke piring. Pastikan untuk memberi label pada pelat yang digunakan untuk pelapisan pengenceran.

Hari berikutnya Anda kembali dan melihat bahwa semua piring memiliki beberapa koloni individu di atasnya. Anda ingin memilih piring antara 30 dan 300 koloni. Anda melihat bahwa pelat pengenceran 1:1.000 memiliki sekitar 10 koloni sehingga berarti Anda terlalu mengencerkan sampel. Pelat itu tidak akan membantu dalam menemukan CFU.

Pelat pengenceran 1:10 memiliki banyak koloni, mungkin lebih dari 300. Dalam hal ini Anda dapat pergi ke piring 1:100. Anda menghitung koloni di piring ini dan menemukan bahwa ia memiliki 179 koloni. Ini berarti 0,5 mL dari pengenceran 1:100 mengandung 179 CFU. Tapi bagaimana dengan sampel aslinya?

Sekarang setelah Anda memiliki beberapa data, Anda dapat melakukan perhitungan CFU dalam sampel asli.

1. Ambil jumlah yang Anda lapisi (0,5 mL) dan kalikan dengan faktor pengenceran (0,01) untuk menghasilkan 0,005. Anda harus melakukan ini untuk menemukan faktor pengenceran yang menghasilkan jumlah CFU Anda. Di sini, setengah mililiter pengenceran 1:100 memungkinkan Anda menghitung CFU.

2. Bagilah CFU dari pengenceran (179) dengan hasil dari Langkah 1 (0,005) untuk menghasilkan 35.800 CFU.

Artinya 1 mL sampel asli yang diencerkan mengandung 35.800 CFU. Cara lain untuk mengatakan ini adalah dengan mengatakan bahwa sampel asli memiliki 35.800 CFU/mL.

CFU adalah alat yang hebat untuk menemukan berapa banyak bakteri, jamur, atau mikroorganisme apa pun yang ada dalam sampel tertentu. Metode pelapisan yang dijelaskan di sini sangat membantu untuk sampel atau organisme yang sangat terkonsentrasi yang tidak tumbuh dengan baik dalam kultur cair.