Bakteri ditumbuhkan dalam cawan Petri di atas media padat yang dikenal sebagai agar bakteri, di mana terbentuk koloni melingkar. Tidak seperti sel bakteri individu, koloni adalah sekelompok bakteri yang cukup besar untuk dapat dilihat dengan mata telanjang. Pertumbuhan bakteri dapat diukur dengan pengamatan sederhana berapa banyak koloni yang ada; namun, metode yang lebih kuantitatif mencakup penggunaan ruang hitung, atau lebih sering, jumlah pelat yang layak. Yang terakhir ini paling sering digunakan karena juga memberikan informasi kualitatif seperti efek dari berbagai kondisi pertumbuhan. Karena mungkin ada miliaran bakteri dalam cawan petri, pengukuran terlebih dahulu memerlukan pengenceran sampel sehingga memungkinkan untuk menghitung jumlah koloni.
Dalam tabung reaksi, tambahkan 10 mikroliter kultur bakteri awal ke 90 mikroliter media pengenceran. Tutup tabung dengan rapat dan vortex perlahan untuk mendapatkan campuran yang homogen. Sekarang sampel adalah sepersepuluh dari konsentrasi aslinya.
Pindahkan 10 mikroliter sampel baru ini ke tabung reaksi baru yang berisi 90 mikroliter media pengenceran, campur lagi. Sekali lagi, hasilnya akan menjadi sampel yang lebih encer - sekarang akan menjadi seperseratus dari konsentrasi aslinya. Ulangi ini beberapa kali, sampai sampel asli telah diencerkan antara 104 dan 1010 waktu. Pastikan setiap tabung diberi label dengan pengenceran yang benar, misalnya 10-1, 10-2 dan seterusnya.
Keluarkan 10 mikroliter pengenceran terakhir yang telah selesai ke piring agar. Dengan menggunakan ujung yang menyebar, sebarkan larutan bakteri ke seluruh permukaan pelat agar-agar. Ulangi ini untuk dua piring lagi. Juga umum untuk melakukan langkah-langkah ini dengan tingkat pengenceran lain untuk perbandingan. Pastikan untuk memberi label pada bagian bawah piring. Pasang kembali tutup pada setiap piring dan biarkan piring agar kering selama beberapa menit baik di bangku laboratorium di bawah api, atau di inkubator. Tempatkan piring di inkubator yang harus diatur ke suhu yang sesuai untuk strain bakteri. Biarkan tumbuh selama 12 hingga 16 jam.
Koloni akan terlihat setelah 16 jam; namun, beberapa modifikasi genetik mungkin memerlukan waktu lebih lama (misalnya, perkembangan warna). Ketika koloni dapat diamati, keluarkan piring dan temukan yang memiliki antara 30 dan 300 koloni. Dengan menggunakan spidol permanen, tempatkan sebuah titik di bagian bawah cawan petri - sisi dengan agar, bukan tutupnya - di mana pun koloni terlihat melalui agar. Hitung setiap titik penanda. Ulangi untuk setiap hidangan.
Untuk mengukur jumlah bakteri dalam biakan awal untuk percobaan ini, pengenceran perlu dibalik dalam perhitungan, di dua tempat. Pertama, ketika Anda mengambil satu mikroliter dari tabung reaksi untuk dimasukkan ke dalam cawan petri, Anda mengambil sepersepuluh dari sampel yang diencerkan, jadi Anda perlu mengalikan semuanya dengan 10 untuk membalikkannya. Selain itu, jika faktor pengenceran dalam tabung reaksi, misalnya, 10-7, maka jumlah koloni harus dikalikan 107 untuk membalikkan efek pengenceran. Hapus saja tanda negatif dari eksponen dalam perhitungan. Gunakan rumus:
[Jumlah koloni dihitung] × 10 × [berapa kali sampel harus dikalikan untuk mendapatkan konsentrasi asli: misalnya, 105] = Jumlah unit pembentuk koloni (CFU) per mililiter kultur awal. Ini adalah pertumbuhan bakteri di cawan petri Anda.
