A vegyészek nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát vagy HPLC-t használnak a vegyületek keverékeinek elválasztására. Általában a módszer abból áll, hogy mintát injektálunk egy oszlopba, ahol egy vagy több oldószerrel keveredik. Különböző vegyületek különböző mértékben adszorbeálódnak vagy „tapadnak” az oszlopra; és amikor az oldószer áttolja a vegyületeket az oszlopon, a keverék egyik alkotóeleme elsőként távozik az oszlopból. A műszer észleli a vegyületeket, amikor kilépnek az oszlopból, és kromatogramot állít elő, amely egy diagramot tartalmaz, amelynek retenciós ideje az x tengelyen van, és a jel intenzitása az y tengely detektorától. Amint a vegyületek kilépnek az oszlopból, „csúcsokat” hoznak létre a kromatogramon. Általában minél távolabb vannak egymástól és minél keskenyebbek a csúcsok a kromatogramon, annál nagyobb a felbontás. A tudósok úgy vélik, hogy az 1,0 vagy annál nagyobb felbontás megfelelő szétválasztást jelent.
Mérjük meg a kromatogram két szomszédos csúcsának szélességét, megjegyezve, hogy az x tengely értékek az egyes csúcsok alapján vannak-e. Az x tengely a retenciós időt jelenti, általában másodpercekben mérve. Tehát, ha egy csúcs 15,1 másodpercnél kezdődik és 18,5 másodpercnél végződik, akkor a szélessége (18,5 - 15,1) = 3,4 másodperc.
Határozza meg a retenciós időket úgy, hogy megjegyzi az időt, vagyis az x tengelyen lévő helyet, amely megfelel a csúcsok maximumainak helyének. Ez az érték általában kb. Félúton helyezkedik el az 1. lépésben a szélesség kiszámításához használt két érték között. Például az 1. lépésben megadott példa maximuma körülbelül 16,8 másodperc.
Számítsa ki a két csúcs közötti R felbontást az alábbiak szerint:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
ahol RT1 és RT2 az 1. és 2. csúcs és a W retenciós idejét képviselik1 és W2 a tövükön vett csúcsok szélességét képviselik. A 2. és 3. lépéstől folytatva a példát, egy csúcs retenciós ideje 16,8 másodperc, szélessége 3,4 másodperc. Ha a második csúcs retenciós ideje 21,4 másodperc, 3,6 másodperc szélességű, akkor a felbontás a következő lenne:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Amire szükséged lesz
- HPLC kromatogram
- Számológép