A gélelektroforézis a laboratóriumokban alkalmazott módszer a szétválasztásra DNS (dezoxiribonukleinsav). Használható az RNS és a fehérjék elválasztására is.
A gélelektroforézis eredményeinek elolvasása lehetővé teszi a kutatók számára, hogy meghatározzák a mintában lévő szálak méretét. A folyamat működésének megértéséhez először meg kell tanulni a gélelektroforézis definícióját.
Gélelektroforézis meghatározása
A gélelektroforézis egy hatékony eszköz, amelyet a molekuláris biológia a DNS, az RNS és a fehérjék méretének és elektromos töltésének meghatározásához. Először olyan DNS-darabokat használ, amelyeket egy nagyobb DNS-szál enzimjei emésztettek meg.
A gélelektroforézis sáv intenzitását felhasználva megtudhatja, hogy mekkora a fragmens. Ezután megszerezheti a DNS ujjlenyomat.
Amint a szó „elektro” részéből kiderül, a gélelektroforézis meghatározása elektromos mező használatával jár. Különleges gépet használnak, amely pufferoldatot tartalmaz, amely eltakarja az elektródákat, egy kútat a gél belsejében szuszpendálódásához és magukat az elektródákat.
A gél a gélelektroforézisben
Gélelektroforézis gél használatát igényli, amely tipikusan a tengeri moszatokból származó agar tisztított változatából készül, úgynevezett agaróz.
Agaróz gélek készítsen egy porózus mátrixot, amelyen keresztül a különböző méretű töltött molekulák különböző sebességgel haladhatnak. Az etídium-bromidnak (EtBr) nevezett vegyszert hozzáadják a géloldathoz, mielőtt azt öntőformába öntenék.
Ha nagyon kicsi a DNS vagy fehérje molekula szétválasztására, akkor szükség lehet a poliakrilamid gél agaróz helyett. Vegye figyelembe, ha a poliakrilamidot alkalmazza, mert neurotoxikus.
Az agaróz gélformába egy speciális fésűt helyeznek, majd megszilárdulása után óvatosan eltávolítják. Ide helyezik a DNS-fragmenst vagy más molekuláris mintákat, amelyeket először összekevertek egy speciális töltőfestékkel. A betöltő festék csak a DNS mozgásának nyomon követése, mivel ez másként nem látható.
Van egy kút is, amely tartalmazza az úgynevezett a DNS létra vagy marker. Ez kiváló minőségű sablonként, ismert sávméretekkel szolgál a méret összehasonlítására a vizsgált DNS-mintákkal. Miután az elektromos mező bejut, ezek a negatív töltésű molekulák a pozitív vég felé haladnak a gélen keresztül.
Gélelektroforézis eredményei
Miután a molekulák eljutottak a gél végéig, itt az ideje az olvasásnak gélelektroforézis eredményei. A gélben lévő EtBr festék könnyen kötődik a DNS-hez, ezért felhasználása, és akkor láthatja, hogy a UV-fény alatt fluoreszkáló DNS-sávok láthatók.
Nagyon ügyelnie kell arra, hogy ne érjen hozzá az etídium-bromidhoz, mert a DNS iránti affinitása azt is jelenti, hogy fel tudja oldani; ezért mutagénnek számít. Most már kaphatók újabb, biztonságosabb színezékek, bár azok ára magasabb.
Az UV-fény rávilágít a DNS vagy más molekuláris minták gélelektroforézis sávjának intenzitására. A szalagok elhelyezkedése egy gélen feltárja a DNS-fragmens. A gél elektroforézis sáv intenzitása feltárja a molekula koncentrációját.
Most összehasonlíthatja a mintáiban lévő DNS sávokat a DNS létra mintájával. A létra ismert sávméretei segítenek meghatározni a vizsgált DNS relatív méretét.
A minőségi gélelektroforézis jelentősége
A gélelektroforézist a DNS-ujjlenyomat és kriminalisztika. Segített a kutatóknak számos faj genomjával kapcsolatos információk meghatározásában. Kiváló minőségű gélelektroforézis eredmények nélkülözhetetlenek ezekhez a fontos területekhez.
Ezért kulcsfontosságú a kiváló minőségű összetevőkkel való munka, és nagy gondossággal kell eljárni a gélek készítésében. Elengedhetetlen a DNS-minták RNS-sel vagy fehérjékkel való szennyeződésének megakadályozása.
Ügyeljen arra, hogy tiszta puffert használjon, óvatosan öntse a gélt, hogy a fésűlyukai egyenletesen képződjenek, és tartsa az összes reagenst a megfelelő hőmérsékleten. Gélelektroforézis a sáv intenzitásának élénknek és tisztának kell lennie, a háttérben nem lehet más DNS nyoma, és semmilyen RNS vagy fehérje kenet nem szennyezi a gélt.