A tudósok áramlási citometriával különbséget tesznek a különféle sejtek vagy mikroszkopikus organizmusok között. Ez egy olyan eszköz, amelyet számos alkalmazásban használnak, például orvosi diagnosztikában vagy törvényszéki patológiában. Bár ezt a kísérleti technikát meglehetősen könnyű kivitelezni, az előállított komplex adatok elemzése az áramlási citométerrel a több kísérleti tényező és / vagy a citométer miatt nehezebb paraméterek. Mint ilyen, rutinszerű, hogy a citometrikus adatokat olyan kifinomult szakmai programok segítségével jelenítsék meg és elemezzék, mint a CELLQuest vagy a FlowJo. Az ezek által elért eredmények megértése érdekében ismerni kell az áramlási citometriás technikákat, a gépeket és a szoftvereket kísérletek.
Tisztázza a kísérlet célját azzal, hogy megkérdezi: "Mi volt a kérdés vagy hipotézis vizsgálata?" Ez lesz az szükséges, hogy a nyers eredményeket a megfelelő formátumhoz és beállításokhoz igazítsák a további elemzéshez a statisztikai citometria segítségével szoftver. Hajtson végre minden szükséges változtatást az adatok megfelelő beállításokkal történő megjelenítéséhez (pl. Pozitív sejtek, negatív kapuk, fluoreszcencia intenzitás, sejtpopulációk stb.).
Keresse meg a kapukat. A sejteket csoportosíthatjuk, vagy egyszerűen megfigyelhetjük csoportosítva egy sűrűségdiagramon vagy kontúrdiagramon. A csoportok gyakran szétválnak identitásuktól függően. Ha egy csoport nagyon intenzíven fest egy adott markert vagy ellenanyagot, arra a következtetésre jutunk, hogy a csoport tagjai mindegyike azonosítja a markert kifejező specifikus sejttípust. Gyakori, hogy olyan sejteket találunk, amelyek több mint egy ilyen marker esetében pozitívak, és ezek a sejtek általában köztitermékek, és "kettős-pozitív" -nak vannak jelölve.
Nézd meg a szórólapokat. A sejtcsoportok szétszóródási ábrán történő szétterjedése a sejtek méretének jelzését mutatja. A nagyon nagy vagy nagy szórású sejtek általában nagy sejtek; lehetnek azonban egyszerűen pusztán azért, mert nagy arányban tartalmaznak citoplazmát, vagy magasak lehetnek, mert nagyon nagy a magjuk. A vizsgált biológiától függően ez természetesen nagy eltéréseket mutat a kísérletek között.
Nézd meg a számokat. Állítsa be a diagramokat úgy, hogy a tengelyen (általában az X tengelyen) különböző paraméterek jelenjenek meg, miközben az Y tengelyen megtartja a számlálást. Ez a mintapopuláció azon arányát jelzi, amely pozitív az adott paraméterre, mivel a a csúcs általában egy pozitívan festett mintában figyelhető meg, amely hiányzik a negatív kontrollból minta.
Nézze meg a több paraméteres hisztogramokat. Ha az X tengelyt és az Y tengelyt úgy állítja be, hogy mindegyik egy másik paramétert képviseljen a kísérlet során vizsgálták, lehet mélyebben megismerni a tulajdonságokat a minta. Például az X tengely vörös fluoreszcenciára és az Y tengely zöld fluoreszcenciára állításával a kvadráns stílusú kapuk kiszámíthatók minta egy olyan kvadráns négy régiójának bemutatására, amelyben a sejtek jelen vannak, és festettek vörös vagy zöld fluoreszcenciára, mindkét szín vagy egy sem minden. Ez lehetővé teszi, hogy a heterogén mintát fel lehessen osztani alkotóelemeire, és az átfedő entitásokat vizualizálni és számszerűsíteni lehessen.
Hivatkozások
- „Áramlási citometriás adatok elemzése”; Susan Sharrow; 1991
- „Áramlási citometria: műszerezés és adatelemzés”; Marvin Van Dila; 1985
- „Áramlási citometriás protokollok”; Teresa és Robert Hawley; 2004
A szerzőről
Palmer Owyoung a Kaliforniai Egyetemen (San Diego) a nemzetközi üzletben szerzett diplomát és a A Santa Barbara-i Kaliforniai Egyetemen szociológia szakon végzett bölcsész és képzett molekula biológus. 2006 óta szabadúszó író. Az írás mellett főállású Forex-kereskedő és internetes marketingszakember.
Fotók
Pöttyös RF / Pöttyös / Getty Images