A folyékony tápoldatot olyan baktériumok tenyésztésére használják, mint az Escherichia coli. Ennek a húslevesnek a receptjei a baktériumtípusoktól és a genetikai módosítások, például az antibiotikum-rezisztencia jelenlététől függően változnak. A húsleves agar hozzáadásával megszilárdulhat, amely lehetővé teszi a baktériumok számára, hogy különálló telepeket képezzenek, míg folyékony tenyészetben egyszerűen szétszóródnak az egész térfogatban. Ez egy olyan alapvető, de elengedhetetlen technika a fejlett módszerekhez, mint például a génklónozás vagy a mikrobiológiai vizsgálatok. Ez a cikk azt feltételezi, hogy a standard laboratóriumi Escherichia coli törzseket Luria húsleves (LB) agarlemezeken (vagy Petri-csészéken) kell tenyészteni.
Mérjünk ki 10 gramm bakteriális minőségű triptont, 5 gramm élesztő kivonatot, 5 gramm nátrium-kloridot, 15 gramm agart vagy agarózt és 1 ml 1 N nátrium-hidroxidot. Keverjük össze ezeket térfogat desztillált és autoklávozott steril vízzel, amíg 1 liter táptalajt nem kapunk. Autoklávozzuk a táptalajt lazán lezárt palackokban vagy lombikokban 25 percig. Hagyja lehűlni körülbelül 50 Celsius-fokig, mielőtt olyan reagenseket adna hozzá, amelyek nagy hő hatására elpusztulnak, például antibiotikumokat vagy más táplálék-kiegészítőket.
Hagyja az autoklávos táptalajt lehűlni 50 Celsius-fokig, és legalább 45 Celsius-fokig, mivel az agar a tartályába merül, mielőtt kiönthetné. Szerezzen be steril petri-csészéket, és öntsön annyit, hogy ellepje a lemez teljes felületét és legalább a mélység felét. Kerülje a tányérok túlteljesítését, és lehetőleg ne engedje, hogy az agar érintkezzen az edény felső szélével. Hagyja a lemezeket megszilárdulni steril környezetben (pl. Lamináris áramlású burkolat alatt) úgy, hogy a fedeleket leválasztja és a motorháztető egyik sarkára hagyja.
Szárítsa meg a lemezeket. Bár a lemezeket fel lehet használni, amint megkötöttek, az agar felületén némi nedvesség lesz jelen, ami megakadályozza a baktériumtelepek kellő tapadását. Ezért a legjobb, ha a lemezeket bármilyen baktérium felvitele előtt megszárítják, például úgy, hogy kiülnek szobahőmérsékleten néhány napig vagy fél órán át lamináris áramlású burkolat alatt vagy 37 Celsius fokos hőmérsékleten inkubátor.
Tárolja a lemezeket. A szárított tányérokat fejjel lefelé kell fordítani (fordítva) a fedelükre, és vissza kell térniük az eredetihez csomagolás, lezárva, vagy fóliába csomagolva, fénytől védve, vagy megfelelő tartály. Mindig írja az elkészítés dátumát a lemezekre, és kerülje a felhasználást, ha a lemezek 2 hónapnál régebbiek.
Hivatkozások
- "A molekuláris biológia jelenlegi protokolljai"; Karen Elbing és Roger Brent; 2002
Tippek
- Hajtsa végre a lehető legtöbb fenti lépést (lehetőleg az összes) steril környezetben (pl nyílt láng vagy lamináris áramlású burkolat), hogy megakadályozza a levegőben lévő baktériumszennyező anyagok bejutását és növekedését a média.
A szerzőről
Palmer Owyoung a Kaliforniai Egyetemen (San Diego) a nemzetközi üzletben szerzett diplomát és a A Santa Barbara-i Kaliforniai Egyetemen szerzett szociológiai művészeti alapképzést, és képzett molekula biológus. 2006 óta szabadúszó író. Az írás mellett főállású Forex-kereskedő és internetes marketingszakember.
Fotók
Jupiterimages / Comstock / Getty Images