A vírus titerének kiszámítása bonyolult módszer annak elmondására, hogy a tudós megszámolja a vírusok számát egy adott mintában. A vírustiterek kiszámításához a tudósok növekvő baktériumok lemezeit fertőzik vírusoldatokkal, különböző koncentrációkban és derítse ki az eredeti oldatban található vírusok számát a vírus miatt elpusztult baktériumok számlálásával fertőzés.
Vegyen fel kesztyűt, töltsön 10 tenyészcsőbe 9 ml húslevest, és jelölje őket „10 ^ -1”, „10 ^ -2”, „10 ^ -3” és így tovább „10 ^ -10” -ig. Ezeket a csöveket a fág kiszámításához használt vírussoros hígításokra használják titer. Mivel a vírusok hihetetlenül magas koncentrációra növekedhetnek, a hatékony megszámoláshoz fel kell hígítani őket. Mindegyik cső a vírus tízszeres hígítását jelenti.
Vegyünk 1 ml kevert tenyészetet a „10 ^ -1” feliratú csövükből, és új pipettával vigyük át a következő, „10 ^ -2” feliratú csőbe. Keverje össze ezt a csövet is.
Folytassa ezt a mintát egy soros hígítási sorozat létrehozásához. Végül 9 cső 9 ml-es és 1 cső 10 ml-es lesz. A csövekben lévő vírusterhelések 10-szeresére (az első tubus) vagy 100-szorosára (a második tubus) tízmilliárdszorra (az utolsó tubusra) hígulnak.
Adjon két csepp baktériumkultúrát az agarjához, és óvatosan keverje össze. Ezek azok a baktériumok, amelyek elpusztulnak, lehetővé téve számodra a vírusrészecskék számát egy adott oldatban.
Adjon hozzá 1 ml-t minden soros hígításból a megfelelő agarcsőbe, miközben a csövek még forró vizes fürdőben vannak. Például a 10 ^ -1 soros hígításból 1 ml-t a „10 ^ -1” feliratú agarcsőbe kell juttatni.
Keverje össze az összes csövet, majd öntse mindegyik csövet a megfelelő címkével ellátott Petri lemezre. Ez egy vékony agarréteget hoz létre, amelyet baktériumok és vírusok beoltottak az egyes lemezekre. Hagyja a lemezeket egy éjszakán át inkubátorban növekedni.
Vegye ki a lemezeit az inkubátorból, és vizsgálja meg őket. A lemez egész területén felhős területeket kell látnia, ahol baktériumok szaporodtak, kivéve az apró, tiszta foltokat, amelyeket plakkoknak neveznek. Ezek a plakkok elhalt baktériumok foltjai, és mindegyik plakett egy vírust képvisel.
Vegyük a tányéron lévő plakkok számát, és szorozzuk meg 10-tel. Ha 157 plakettet számlálna, akkor 1570-et kapna.
Szorozza meg az előző lépésben kapott számot a hígítócsövön lévő szám inverzével. Például, ha a kiválasztott lemez a 10 ^ -5 lemez volt, akkor az 1570-et 10 ^ 5-gyel megszorozva megkapta a 157000000 értéket. Ez a végső szám az Ön fágtitere, és az eredeti kultúra milliliterenként a vírusok számát jelenti.