A tanárod átadja neked a baktériumok mintáját, és megkérdezi: Hány életképes mikroorganizmus van ebben a mintában? Mit jelent ez, és hogyan találja ki? Az egyik módszer az, hogy megtaláljuk a számukat kolóniaképző egységek(CFU).
Mik azok a CFU-k?
A CFU a táptalajon növekvő mikroorganizmusok egyedi telepeinek számát jelenti. Ez az érték viszont a replikálni képes baktériumok számát jelenti, amikor telepeket képeztek a lemezen. Van egy CFU-formula, amely mintavételt tartalmaz.
Hogyan talál CFU-t?
A folyékony mintában található baktériumok számának megszámlálása nagyon nehéz. Túl sok van belőlük, és túl kicsi. Továbbá lehet, hogy közülük néhányan halottak, mások pedig életben vannak, és a halottaknak nem kellene beleszámítaniuk a teljes összegbe. Csak az érdekli életképes baktériumok, vagy olyan baktériumok, amelyek képesek szaporodni. Tehát hogyan lehet kideríteni, hogy hány baktériuma van?
Ugyanúgy, mint egy 1000 fős közvélemény-kutatást, és alkalmazhatja azt 10 000 emberre, hogy kiderítse, hogyan gondolkodhatnak egy adott témáról. Kipróbálhatja az eredeti mintájának kis részét, kitalálhatja, hogy hány baktérium van benne ezt a részt, majd számolva becsülje meg, hányan lehettek az eredetiben minta.
Hígítások használata a CFU megtalálásához
Az adott minta CFU-jának meghatározására szolgáló eljárás magában foglalja a minta első hígítását. A hígításokat ezután a megfelelő tenyészközeggel ellátott lemezekre szélesztjük. A többszörös hígítás gyakran jó ötlet, mivel az eredeti minta nagyon koncentrált lehet.
Miután egy bizonyos ideig hagyta, hogy a baktériumok növekedjenek a lemezeken, egyes telepek tányérra számítanak. Ha a minta túl koncentrált volt, akkor az egyes telepek helyett egy nagy baktériumnövekedéssel borított területet fogunk látni, amelyet a gyep. Ez azt jelenti, hogy tovább kell hígítania a mintáját, és újra meg kell próbálni a növekedést, hogy láthassa az egyes telepeket.
Mivel az egyes telepek egyetlen baktériumtól származnak, amely sokszor replikálódik, csak ezek számítanak a CFU-ra.
Kísérleti eljárás a CFU megtalálásához
A CFU kiszámításához hígítások felhasználására példa a következő lehet: Először is, a tanár által adott kezdeti mintából vegyen 1 ml-t, és tegye le. Másnap látja, hogy baktériumok vannak gyepen. Ez azt jelenti, hogy nem tudja megszámolni a CFU számát. A következő lépés néhány hígítás.
Először vegyen 1 ml mintát és hígítsa 9 ml folyékony közegbe. Mivel a hígítás egyrész minta kilenc rész hígítószerre vonatkozik, ezt 1:10 arányú hígításnak nevezzük. Ezután vegyen 1 ml 1:10 arányú hígítást, és adja hozzá 9 ml folyékony közeghez. Ez a hígítás 1: 100 hígítás. Végül 1: 1 000 arányú hígítást hajt végre úgy, hogy 1 ml-t vesz az 1: 100 arányú hígításból, és hozzáad 9 ml folyékony közeget. Minden hígításhoz most 10 ml hígított baktériumtenyészettel rendelkezik.
Kész hígítások, a hígítások 0,5 ml-ét lemezekre tányérra helyezzük. Győződjön meg arról, hogy fel van-e jelölve azok a lemezek, amelyekkel hígítást alkalmaztak.
Másnap visszajössz, és látod, hogy az összes lemezen van néhány egyéni telep. Tányért akarsz választani 30 és 300 telep. Látja, hogy az 1: 1 000 hígítólemez körülbelül 10 telepet tartalmaz, ez azt jelenti, hogy túlhígította a mintát. Ez a lemez nem lesz hasznos a CFU megtalálásában.
Az 1: 10-es hígítólemeznek sok kolóniája van, talán több mint 300. Ebben az esetben felmehet az 1: 100 lemezre. Megszámolja a kolóniákat ezen a lemezen, és megállapítja, hogy 179 kolóniája van. Ez azt jelenti, hogy az 1: 100 hígítás 0,5 ml-je 179 CFU-t tartalmaz. De mi van az eredeti mintával?
Mi az a CFU-számítás?
Most, hogy van néhány adata, elvégezheti a CFU számítását az eredeti mintában.
1. Vegyük be a bevont mennyiséget (0,5 ml), és szorozzuk fel a hígítási tényezővel (0,01), így 0,005-t kapunk. Ezt meg kell tennie, hogy megtalálja azt a hígítási tényezőt, amely megadta a CFU-számot. Itt az 1: 100 hígítás fél milliliterje lehetővé tette a CFU számlálását.
2. Osszuk el a CFU-t a hígításból (179) az 1. lépés eredményével (0,005), így 35 800 CFU-t kapunk.
Ez azt jelenti, hogy az eredeti 1 ml hígított minta 35 800 CFU-t tartalmaz. Ennek másik módja az, ha azt mondjuk, hogy az eredeti minta 35 800 CFU / ml.
A CFU nagyszerű eszköz annak kiderítésére, hogy egy adott mintában hány baktérium, gomba vagy mikroorganizmus van. Az itt leírt lemezelési módszer különösen hasznos nagyon koncentrált minták vagy organizmusok esetében, amelyek folyékony tenyészetekben nem jól növekednek.