Kemičari koriste tekućinsku kromatografiju visokih performansi ili HPLC za odvajanje smjesa spojeva. Općenito, metoda se sastoji od ubrizgavanja uzorka u kolonu gdje se miješa s jednim ili više otapala. Različiti spojevi različito se adsorbiraju ili "lijepe" na stupcu; i dok otapalo gura spojeve kroz kolonu, jedna od komponenata smjese prva će izaći iz kolone. Instrument otkriva spojeve dok izlaze iz kolone i stvara kromatogram koji se sastoji od grafikona s vremenom zadržavanja na x osi i intenzitetom signala iz detektora na y osi. Kako spojevi izlaze iz kolone, oni stvaraju "vrhove" na kromatogramu. Općenito, što su dalje i što su vrhovi na kromatogramu uža, to je veća razlučivost. Znanstvenici smatraju da razlučivost 1,0 ili veća predstavlja odgovarajuće razdvajanje.
Izmjerite širinu dva susjedna vrha na kromatogramu bilježeći gdje su vrijednosti x osi u osnovi svakog vrha. Os x predstavlja vrijeme zadržavanja, obično mjereno u sekundama. Dakle, ako vrh počinje u 15,1 sekunde i završava u 18,5 sekundi, njegova širina je (18,5 - 15,1) = 3,4 sekunde.
Odredite vrijeme zadržavanja bilježeći vrijeme, tj. Mjesto na x osi, koje odgovara mjestima maksimuma vrhova. Ta će vrijednost obično biti otprilike na pola puta između dvije vrijednosti korištene za izračunavanje širine u koraku 1. Primjer naveden u koraku 1, na primjer, pokazao bi maksimum oko 16,8 sekundi.
Izračunajte rezoluciju R između dva vrha prema:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
gdje je RT1 i RT2 predstavljaju retencijska vremena vrhova 1 i 2 i W1 i W2 predstavljaju širine vrhova zauzetih u njihovim bazama. Nastavljajući primjer iz koraka 2 i 3, jedan vrh pokazuje vrijeme zadržavanja od 16,8 sekundi i širinu od 3,4 sekunde. Ako je drugi vrh pokazivao vrijeme zadržavanja od 21,4 sekunde sa širinom od 3,6 sekundi, tada bi razlučivost bila:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Stvari koje ćete trebati
- HPLC kromatogram
- Kalkulator
