Tekuća hranjiva juha koristi se za uzgoj bakterija kao što je Escherichia coli. Recepti za ovu juhu razlikuju se ovisno o bakterijskim vrstama i prisutnosti genetskih modifikacija, npr. Rezistencije na antibiotike. Juha se može skrutnuti dodavanjem agara, koji omogućava bakterijama da stvaraju različite kolonije, dok se u tekućoj kulturi jednostavno rasprše po cijelom volumenu. Ovo je osnovna, ali bitna tehnika za napredne metode poput kloniranja gena ili mikrobioloških ispitivanja. Ovaj članak pretpostavlja da se standardni laboratorijski sojevi Escherichia coli trebaju uzgajati na pločicama agar-bujona Luria (LB) (ili petrijevim zdjelicama).
Izvažite 10 grama triptona bakterijskog stupnja, 5 grama ekstrakta kvasca, 5 grama natrijevog klorida, 15 grama agara ili agaroze i 1 mililitar 1N natrijevog hidroksida. Pomiješajte ih s količinom destilirane i autoklavirane sterilne vode dok se ne dobije 1 litra medija. Autoklavirajte medij u bocama ili tikvicama u zatvorenom stanju 25 minuta. Ostavite da se ohladi na približno 50 Celzijevih stupnjeva prije dodavanja reagensa koji će se uništiti pri visokoj vrućini, poput antibiotika ili drugih prehrambenih dodataka.
Ostavite da se autoklavirani medij ohladi na 50 Celzijevih stupnjeva i ne niži od 45 Celzijevih stupnjeva, jer će se agar stvoriti u svojoj posudi prije nego što se može uliti. Nabavite sterilne petrijeve posude i ulijte toliko da pokrije cijelu površinu ploče i barem polovicu njegove dubine. Izbjegavajte prekomjerno punjenje tanjura i po mogućnosti ne dopustite da agar dodiruje gornji rub posude. Ostavite da se ploče skrutnu u sterilnom okruženju (npr. Ispod laminarne nape) ostavljajući poklopce spuštenog i u kut nape.
Osušite tanjure. Iako se ploče mogu koristiti čim se postave, na površini agara bit će prisutno malo vlage, što će spriječiti da se kolonije bakterija dovoljno prilijepe. Stoga je ploče najbolje osušiti prije nanošenja bakterija, na primjer tako da ih ostavite da sjede sobne temperature nekoliko dana ili pola sata pod laminarnom kapuljačom ili na 37 Celzijevih stupnjeva inkubator.
Spremite tanjure. Osušene ploče treba složiti naopako (obrnuto) na poklopce i vratiti u izvorne ambalažu, zalijepljenu trakom i umotanu u foliju radi zaštite od svjetlosti ili u odgovarajuću kontejner. Uvijek na tablice upišite datum pripreme i izbjegavajte upotrebu ako su ploče stare više od 2 mjeseca.
Reference
- "Trenutni protokoli u molekularnoj biologiji"; Karen Elbing i Roger Brent; 2002
Savjeti
- Izvedite što je moguće više gore navedenih koraka (po mogućnosti sve) u sterilnom okruženju (npr. Pod otvoreni plamen ili poklopac laminarnog protoka) kako bi se spriječilo ulazak i rast bakterijskih zagađivača u zraku mediji.
o autoru
Palmer Owyoung magistrirao je međunarodno poslovanje na Kalifornijskom sveučilištu u San Diegu i Diplomirani umjetnik sociologije sa Kalifornijskog sveučilišta u Santa Barbari i školovani je molekular biolog. Slobodni je pisac od 2006. godine. Uz pisanje, stalni je Forex trgovac i prodavač Interneta.
Foto bodovi
Jupiterimages / Comstock / Getty Images