Kako brojati kolonije u mikrobiologiji

Jedan od klasičnih načina određivanja koncentracije mikroba u uzorku je razrjeđivanje uzorka, uzgoj mikroba na pločama i brojanje kolonija. Pokriveni mikrobi izrastu iz jedinice koja formira koloniju koja se sastoji od jedne ili više stanica u vidljivu koloniju koju se može vidjeti i prebrojati. Bakterije su najčešći mikrobi za procjenu pomoću broja pločica. Brojanje kolonija koristi se za otkrivanje i brojanje mikroba u tlu, vodi i hrani. Protokoli za brojanje kolonija ističu točan i metodičan pristup.

Ako uzorak mikroba jednostavno namažete na pločicu s agarom, vidjet ćete toliko jedinica koje tvore kolonije da će se pojedinačne kolonije stopiti, što ih čini nemogućim za brojanje. Da biste riješili taj problem, umiješajte uzorak u tekući medij, uzmite malu količinu te smjese i dalje je razrijedite. Ponovite ovaj postupak šest do 10 puta. Konačno razrjeđenje rasporedite na agar ploču i inkubirajte ga četiri do sedam dana prije nego što izbrojite kolonije.

Primarni trik u brojanju kolonija je brojanje svake kolonije jednom. Jedan od pristupa je postavljanje Petrijeve zdjelice na mrežnu pozadinu i brojanje kolonija u svakoj mrežnoj ćeliji, krećući se u metodičnom obrascu kroz sve stanice. Označavanje prebrojanih kolonija na poleđini Petrijeve zdjelice također može biti koristan pristup. Općenito, morat ćete izbrojati najmanje tri ploče; Koristite samo ploče koje sadrže 30 do 300 kolonija za snažno zaključivanje, predlaže Microbiology Network, tvrtka koja pruža savjetodavne usluge laboratorijima i proizvođačima. Ploče s kolonijama koje su premale za brojanje ili s premalo kolonija potrebno je presaditi iz novog razrjeđenja.

Ljudska pogreška dodaje vrijeme uključeno u ručno brojanje kolonija. Da biste poboljšali i točnost i učinkovitost, stavite Petrijevu zdjelicu u automatizirani uređaj za brojanje kolonija. Automatizirani brojači kolonija fotografiraju jelo, odvajaju kolonije od pozadine, a zatim pomoću algoritma broje kolonije na tanjuru. Algoritmi mogu imati poteškoća u razlikovanju kolonija kada se dvije ili više kolonija dodiruju na rubovima, pa je ovo područje u tijeku razvoj softvera.

Točnost izračunavanja gustoće mikroba iz broja kolonija ima određena ograničenja. Jedinice koje tvore kolonije mogu biti jedna stanica, lanac stanica ili cijela nakupina stanica. Pretpostavka je da kolonija predstavlja jednu stanicu, pa koncentracije izračunate iz broja kolonija mogu biti niske. Različiti mikrobi trebaju različite uvjete rasta, a kolonije na ploči predstavljaju samo one mikrobe koji uspijevaju na tom rastnom mediju u tim uvjetima inkubacije. Osim toga, brojanjem kolonija ne registriraju se mrtve stanice, što je važno kad trebate koncentraciju stanica u izvornom uzorku.