Tekuća kromatografija visokih performansi (HPLC) laboratorijska je tehnika koja se koristi za odvajanje i identifikaciju spojeva. To je vrsta kolonske kromatografije koja se oslanja na različite polaritete spojeva u otopini kako bi ih razdvojila. HPLC se razlikuje od standardne kromatografije na koloni jer koristi tlak da brže protjera otopinu kroz kolonu i stoga daje brže, a ponekad i preciznije rezultate. Cilj je odvojiti spojeve u koloni i omogućiti im da izlaze zasebno.
Zbog brzine HPLC i oslanjanja na različite polaritete spojeva, dva spoja s slična struktura i polariteti mogu istodobno ili gotovo isti izaći iz aparata za kromatografiju vrijeme. To je poznato kao koelucija. Koelucija otežava točno određivanje koji se dio smjese eluirao u kojem trenutku.
HPLC obično koristi stakleni stupac ispunjen zrncima izrađenim od različitih materijala. Smjese koje se provlače kroz kolonu imaju kemikalije koje se različitom snagom vežu na kuglice. Snaga vezanja, koja ovisi o sličnosti u polarnosti, određuje koliko će se dugo kemikalija vezati na zrno prije nego što se oslobodi. Neki se spojevi vežu tako snažno da se u osnovi nikada ne oslobađaju iz zrnaca u koloni i nikada se ne mjere u otopini koja izlazi iz kolone.
Tipične laboratorijske tehnike odvajanja uključuju razvijanje pokusa ili metode odvajanja, a zatim provedbu pokusa za odvajanje pojedinih spojeva od otopine. Međutim, to obično rezultira višestrukim rješenjima koja također trebaju proći postupke, što dovodi do eksponencijalnog povećanja složenosti. Iako HPLC često može pojednostaviti i ubrzati ovaj postupak, troškovi razvoja HPLC uređaja mogu postati ogromni. Razvoj HPLC uređaja, iako mnogo učinkovitiji, mnogo je skuplji od razvoja drugih testova za odvajanje spojeva. Zbog toga mnogi financijski laboratoriji u privatnom vlasništvu nisu financijski isplativi.
HPLC se ne koristi samo za odvajanje jednostavnih spojeva, već se koristi i za izoliranje specifičnih proteina iz stanične smjese. U tom su slučaju zrnca u koloni obično presvučena antitijelom specifičnim za protein koji trebate prikupiti. Proteini vežu antitijela, a preostala otopina prolazi kroz kolonu, a zatim se proteini oslobađaju pomoću druge otopine i sakupljaju. To zahtijeva visoko kvalificiranog tehničara da cijelo vrijeme nadgleda stupac i osigurava da postupak teče točno onako kako je planirano.