यौगिकों के मिश्रण को अलग करने के लिए रसायनज्ञ उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी या एचपीएलसी का उपयोग करते हैं। सामान्य तौर पर, विधि में एक नमूने को एक स्तंभ में इंजेक्ट करना होता है जहां यह एक या अधिक सॉल्वैंट्स के साथ मिश्रित होता है। विभिन्न यौगिकों adsorb, या "छड़ी," कॉलम को अलग-अलग डिग्री तक; और जैसे ही विलायक कॉलम के माध्यम से यौगिकों को धक्का देता है, मिश्रण के घटकों में से एक पहले कॉलम से बाहर निकल जाएगा। उपकरण यौगिकों का पता लगाता है क्योंकि वे स्तंभ से बाहर निकलते हैं और एक क्रोमैटोग्राम तैयार करते हैं जिसमें एक्स-अक्ष पर अवधारण समय और वाई-अक्ष पर डिटेक्टर से संकेत तीव्रता के साथ एक प्लॉट होता है। जैसे ही यौगिक स्तंभ से बाहर निकलते हैं, वे क्रोमैटोग्राम में "शिखर" उत्पन्न करते हैं। सामान्य तौर पर, क्रोमैटोग्राम में चोटियाँ जितनी दूर और संकरी होती हैं, रिज़ॉल्यूशन उतना ही अधिक होता है। वैज्ञानिक पर्याप्त पृथक्करण का प्रतिनिधित्व करने के लिए 1.0 या उच्चतर के संकल्प पर विचार करते हैं।
क्रोमैटोग्राम में दो आसन्न चोटियों की चौड़ाई को ध्यान में रखते हुए मापें जहां एक्स-अक्ष मान प्रत्येक शिखर के आधार पर हैं। एक्स-अक्ष अवधारण समय का प्रतिनिधित्व करता है, जिसे आमतौर पर सेकंड में मापा जाता है। इस प्रकार, यदि कोई चोटी १५.१ सेकंड से शुरू होती है और १८.५ सेकंड पर समाप्त होती है, तो इसकी चौड़ाई (18.5 - 15.1) = 3.4 सेकंड होती है।
समय को ध्यान में रखते हुए अवधारण समय निर्धारित करें, यानी, एक्स-अक्ष पर स्थान, जो चोटियों के मैक्सिमा के स्थानों से मेल खाता है। यह मान आम तौर पर चरण 1 में चौड़ाई की गणना करने के लिए उपयोग किए जाने वाले दो मानों के बीच लगभग आधा होगा। उदाहरण के लिए, चरण 1 में दिया गया उदाहरण, अधिकतम 16.8 सेकंड पर प्रदर्शित होगा।
दो चोटियों के बीच संकल्प, आर की गणना करें:
आर=\frac{RT_1-RT_2}{0.5(W_1+W_2)}
जहां आरटीई1 और आरटीई2 चोटियों 1 और 2 के अवधारण समय का प्रतिनिधित्व करते हैं, और W1 और डब्ल्यू2 उनके ठिकानों पर ली गई चोटियों की चौड़ाई का प्रतिनिधित्व करते हैं। चरण 2 और 3 से उदाहरण जारी रखते हुए, एक चोटी 16.8 सेकंड का अवधारण समय और 3.4 सेकंड की चौड़ाई प्रदर्शित करती है। यदि दूसरा शिखर 3.6 सेकंड की चौड़ाई के साथ 21.4 सेकंड का अवधारण समय प्रदर्शित करता है, तो संकल्प होगा:
आर=\frac{21.4-16.8}{0.5(3.4+3.6)}=1.3
चीजें आप की आवश्यकता होगी
- एचपीएलसी क्रोमैटोग्राम
- कैलकुलेटर
