सेल एकाग्रता की गणना कैसे करें

वैज्ञानिकों और तकनीशियनों को अक्सर निलंबन में कोशिकाओं की एकाग्रता की गणना करने की आवश्यकता होती है। उदाहरण के लिए, जब कोई रोगी डॉक्टर के कार्यालय में अपना रक्त लेता है, तो प्रयोगशाला रक्त की एक निश्चित मात्रा में श्वेत रक्त कोशिकाओं की मात्रा देखने के लिए कुछ विधियों का उपयोग कर सकती है। इससे डॉक्टर को उसके रोगी के स्वास्थ्य के बारे में बहुत सारी जानकारी मिलती है, विशेष रूप से उसकी प्रतिरक्षा प्रणाली और क्या वह किसी संक्रमण या किसी अन्य बीमारी से लड़ रहा है। इस तरह के परीक्षण रक्त में कई अन्य कोशिकाओं के साथ-साथ रीढ़ की हड्डी के तरल पदार्थ और अन्य शारीरिक तरल पदार्थ की तलाश कर सकते हैं, जैसे कि शुक्राणु कोशिका प्रजनन उद्देश्यों के लिए वीर्य में गिना जाता है। वैज्ञानिक पारिस्थितिक अनुसंधान से लेकर औद्योगिक प्रौद्योगिकियों तक कई उद्देश्यों के लिए बैक्टीरिया, यीस्ट और अन्य सूक्ष्मजीवों की कोशिका सांद्रता की गणना भी करते हैं। सबसे आम तकनीकों में से एक को कई कॉलेज जीव विज्ञान कक्षाओं में भी पढ़ाया जाता है, और यह एक उपकरण का उपयोग करता है जिसे गिनती कक्ष कहा जाता है।

इससे पहले कि सेल सस्पेंशन काउंटिंग चैंबर में जा सके, इसे कमजोर पड़ने की आवश्यकता हो सकती है क्योंकि इसमें हजारों या लाखों सेल हो सकते हैं। उस स्थिति में, कोशिकाओं को यथोचित रूप से नहीं गिना जा सकता है। नमूना को पतला करने के लिए, एक तनु के 90 माइक्रोलीटर युक्त टेस्ट ट्यूब में सेल समाधान के दस माइक्रोलीटर रखने के लिए एक बाँझ पिपेट का उपयोग करें। तनुकारक का प्रकार कोशिका के प्रकार पर निर्भर करेगा। इसे अच्छे से मिलाएं। यह घोल अब प्रारंभिक नमूने की तुलना में दस गुना अधिक पतला है, इसलिए इसका कमजोर पड़ने वाला कारक 10. है

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-1. इसे उपनाम दें। समाधान पर्याप्त पतला होने तक, हर बार एक बाँझ पिपेट का उपयोग करके इसे कई बार दोहराएं। यदि आपने इसे दूसरी बार पतला किया, तो दूसरी परखनली प्रारंभिक घोल की तुलना में 100 गुना अधिक तनु थी, इसलिए तनुकरण कारक 10 था-2 और इसी तरह।

मतगणना कक्ष के लिए सही कमजोर पड़ने वाले कारक को निर्धारित करने के लिए आपको कई कमजोर पड़ने की कोशिश करनी पड़ सकती है। एक गणना कक्ष मूल रूप से एक बहुत छोटा, स्पष्ट, आयताकार बॉक्स होता है जिसमें एक सटीक गहराई होती है और शीर्ष पर एक सटीक ग्रिड अंकित होता है। इसे हेमोसाइटोमीटर, या कभी-कभी हेमासाइटोमीटर के रूप में भी जाना जाता है। इसका उद्देश्य निलंबन को इतना पतला करना है कि जब इसे गिनती कक्ष में देखा जाता है, तो कोई भी सेल ओवरलैप नहीं होता है, और वे एक समान तरीके से पूरे ग्रिड में वितरित किए जाते हैं। पतला निलंबन पिपेट करें जिसमें कोशिकाओं को गिनती कक्ष में कुएं में रखा जाता है, जहां यह केशिका क्रिया के माध्यम से ग्रिड कक्ष में बस जाएगा। मतगणना कक्ष को माइक्रोस्कोप स्टेज पर रखें और इसे कम शक्ति के नीचे देखें।

ग्रिड में वर्ग होते हैं जो और भी छोटे वर्गों से बने होते हैं। चार कोनों और एक केंद्र वर्ग जैसे अपने चयन के पैटर्न में लगभग चार या पांच वर्गों का चयन करें, या जितने आपको कम से कम 100 कोशिकाओं की गणना करने की आवश्यकता है। यदि कोशिकाएँ बड़ी हैं, तो ये बड़े वर्ग हो सकते हैं, लेकिन यदि कोशिकाएँ छोटी हैं, तो आप इसके बजाय छोटे वर्ग चुन सकते हैं।

प्रत्येक ग्रिड वर्ग की विशिष्ट मात्रा चैम्बर निर्माता की गणना के अनुसार भिन्न हो सकती है, लेकिन अक्सर, कक्ष की गहराई 0.1. होती है मिलीमीटर, बड़े वर्गों का क्षेत्रफल 1 वर्ग मिलीमीटर है, और छोटे वर्गों का क्षेत्रफल 0.04 वर्ग है मिलीमीटर। फिर, बड़े वर्गों में 0.1 घन मिलीमीटर का आयतन होता है। इस उदाहरण के लिए, मान लें कि आपने पांच वर्गों में कुल १०३ कोशिकाओं की गणना की, और यह कि आपने प्रारंभिक नमूने को तब तक पतला किया जब तक कि कमजोर पड़ने का कारक १० नहीं था।-2.

यदि प्रत्येक ग्रिड वर्ग में ०.१ घन मिलीमीटर का आयतन होता है और पाँच गिने जाते हैं, तो गिने गए कक्ष का कुल आयतन ०.५ घन मिलीमीटर था, और १०३ कोशिकाएँ थीं। इसे दोगुना करने पर इसे 1 क्यूबिक मिलीमीटर बनाने से यह 206 सेल बन जाएगा। एक घन सेंटीमीटर 1 मिली लीटर के बराबर होता है, जो तरल पदार्थों के लिए एक उपयोगी माप है। एक घन सेंटीमीटर में 1,000 घन मिलीमीटर होते हैं। इसलिए, यदि निलंबन का एक घन सेंटीमीटर या एक मिलीलीटर होता, तो आप 206,000 (206 x 1,000) कोशिकाओं को गिनते। यह एक समीकरण की तरह दिखता है:

ग्रिड वर्ग का आयतन × गिने गए वर्गों की संख्या = गिने गए निलंबन का कुल आयतन

कोशिकाओं की संख्या गिने हुए निलंबन का आयतन = कक्ष संख्या प्रति मिलीमीटर घनघना

सेल काउंट प्रति मिलीमीटर क्यूबेड × १००० = सेल काउंट प्रति मिलीलीटर

माइक्रोस्कोप के तहत प्रारंभिक समाधान को गणनीय बनाने के लिए किए गए किसी भी कमजोर पड़ने के लिए आपको खाते की आवश्यकता होगी। इस उदाहरण में, कमजोर पड़ने वाला कारक 10. है-2. समाधान की प्रारंभिक एकाग्रता की गणना करने के लिए:

प्रति मिलीलीटर सेल गिनती कमजोर पड़ने का कारक = सेल एकाग्रता

इस उदाहरण के लिए, प्रति मिलीलीटर सेल की संख्या 206,000 है, और इसे 10. से विभाजित किया जाता है-2 (0.01) प्रारंभिक नमूने में प्रति मिलीलीटर २०,६००,००० कोशिकाओं की एक सेल एकाग्रता देता है।

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