वैद्युतकणसंचलन का विश्लेषण कैसे करें

यह निर्धारित करने के लिए कि कौन से नमूने किस लेन में लोड किए गए थे, अपनी लैब नोटबुक की जाँच करें। जब आपने अपने जेल के लिए कुओं को लोड किया, तो आपको प्रत्येक लेन/नमूने की पहचान नोट करनी चाहिए थी।

रूलर का उपयोग करके, अपने चित्र पर कुओं से ट्रैकिंग डाई तक की दूरी को मापें, जो which किसी भी डीएनए बैंड की तुलना में आगे की यात्रा की है (दूसरे शब्दों में, यह सबसे नीचे होगा) जेल)। इस संख्या को रिकॉर्ड करें -- आपके द्वारा उपयोग की जाने वाली इकाइयाँ महत्वपूर्ण नहीं हैं।

अपने चित्र पर कुओं से "सीढ़ी" में प्रत्येक बैंड तक की दूरी को मापें, फिर उस दूरी को द्वारा तय की गई दूरी से विभाजित करें ट्रैकिंग डाई बैंड यह गणना आपको प्रत्येक बैंड की सापेक्ष गतिशीलता प्रदान करती है।

उदाहरण: मान लीजिए कि ट्रैकिंग डाई बैंड ने 6 इंच की यात्रा की और हमारे पास तीन बैंड हैं जिन्होंने 5, 4.5 और 3.5 इंच की यात्रा की।

उनकी सापेक्ष गतिशीलता क्या है? उत्तर: 0.833, 0.75 और 0.5833 की सापेक्ष गतिशीलता प्राप्त करने के लिए हम 5, 4.5 और 3.5 को 6 से विभाजित करते हैं।

निर्माता आपको उनके द्वारा आपूर्ति की जाने वाली सीढ़ी में प्रत्येक टुकड़े का आकार देता है, इसलिए आपके पास पहले से ही यह जानकारी होनी चाहिए।

डेटा के समीकरण में फ़िट होने के लिए अपने स्प्रैडशीट प्रोग्राम पर ट्रेंडलाइन फ़ंक्शन का उपयोग करें। यह समीकरण एक शक्ति समीकरण (जैसे x^-2) होना चाहिए और डेटा को अपेक्षाकृत अच्छी तरह से फिट होना चाहिए (कम से कम 0.9 का आर-गुणांक)। यह एक वक्र और एक मानक वक्र बनाता है एक्सेल.

याद रखें कि छोटे डीएनए टुकड़े बड़े डीएनए टुकड़ों की तुलना में जेल के माध्यम से आगे बढ़ते हैं, इसलिए ट्रैकिंग डाई के सबसे करीब वाले सबसे छोटे होंगे। हालाँकि, ध्यान दें कि यदि प्लाज्मिड (गोलाकार) डीएनए बिना काटा हुआ है, यह "सुपरकोल्ड" हो जाएगा या टेलीफोन कॉर्ड की तरह मुड़ जाएगा, जो वास्तव में इसे यात्रा करने का कारण बनेगा आगे एक ही आकार के रैखिक डीएनए की तुलना में।

इसी तरह, एक "निकट" प्लास्मिड जिसे अपूर्ण रूप से काटा गया है वह यात्रा करेगा a कम समान आकार के रैखिक डीएनए से दूरी। नतीजतन, आप अपने जेल से बिना काटे प्लास्मिड के आकार का अनुमान नहीं लगा सकते।

प्रत्येक लेन में बैंड को उस लेन में लोड किए गए नमूने की पहचान के साथ मिलाएं और निर्धारित करें कि आप जो देखते हैं वह वही है जिसकी आपने अपेक्षा की थी। यह आपके प्रयोग की प्रकृति पर निर्भर करेगा।

सामान्य तौर पर, हालांकि, यदि आप दो प्रतिबंध एंजाइमों के साथ एक सम्मिलित प्लास्मिड को पचाते हैं, तो आप उम्मीद करेंगे कि सम्मिलित प्लास्मिड से मुक्त हो जाएगा।

चूंकि यह प्लास्मिड से बहुत छोटा है, आप उस लेन में दो बैंड देखने की उम्मीद करेंगे, एक ऊपर के पास और दूसरा नीचे के पास। केवल एक प्रतिबंध एंजाइम के साथ एक प्लास्मिड काट केवल एक ही बैंड बनाना चाहिए जो दो के साथ प्लास्मिड कट की तुलना में थोड़ा आगे की यात्रा करता है प्रतिबंधित एंजाइम, लेकिन कहीं भी डालने के करीब नहीं है।

कुओं से कटे हुए प्लास्मिड तक की दूरी को मापें और अपने शासक के साथ बैंड डालें। इन नंबरों को इन्सर्ट और कट प्लास्मिड की सापेक्ष गतिशीलता खोजने के लिए ट्रैकिंग डाई द्वारा तय की गई दूरी से विभाजित करें।