पश्चिमी सोख्ता के नुकसान

पश्चिमी सोख्ता जैव रासायनिक प्रयोगशालाओं में सबसे आम प्रक्रियाओं में से एक है। मूल रूप से, यह प्रोटीन को एक नमूने से आकार के अनुसार अलग करता है, फिर एंटीबॉडी का उपयोग करके यह निर्धारित करने के लिए परीक्षण करता है कि कोई प्रोटीन मौजूद है या नहीं। यह न केवल अनुसंधान में बल्कि चिकित्सा या नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं में भी उपयोगी है; एचआईवी और लाइम रोग दोनों के लिए परीक्षण, उदाहरण के लिए, एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) परीक्षण शामिल है, इसके बाद एक पश्चिमी धब्बा है यदि एलिसा परीक्षण सकारात्मक है। हालांकि, इसकी लोकप्रियता के बावजूद, पश्चिमी सोख्ता के कई नुकसान हैं।

शास्त्रीय पश्चिमी धब्बा गैर-मात्रात्मक हैं। दूसरे शब्दों में, जबकि वे शोधकर्ताओं को बता सकते हैं कि क्या कोई विशेष प्रोटीन मौजूद है, वे यह निर्धारित करना संभव नहीं बनाते हैं कि प्रोटीन कितना मौजूद है। कुछ बायोटेक कंपनियां अब किट बेचती हैं जो शोधकर्ताओं या लैब तकनीशियनों को इसकी मात्रा निर्धारित करने में सक्षम बनाती हैं एक मानक वक्र का उपयोग करके मौजूद प्रोटीन - लेकिन यह तभी काम करता है जब उसी प्रोटीन के शुद्ध नमूने हों उपलब्ध। इसके अलावा, एक प्रोटीन के आणविक भार का अनुमान केवल पश्चिमी सोख्ता के साथ लगाया जा सकता है, न कि मास स्पेक्ट्रोमेट्री के साथ सटीक रूप से निर्धारित किया जाता है।

एक पश्चिमी धब्बा केवल तभी किया जा सकता है जब ब्याज के प्रोटीन के खिलाफ प्राथमिक एंटीबॉडी उपलब्ध हों। जबकि कई अलग-अलग प्रोटीनों के लिए एंटीबॉडी बायोटेक कंपनियों से उपलब्ध हैं, वे सस्ते नहीं हैं; यदि किसी दिए गए प्रोटीन के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी उपलब्ध नहीं हैं, तो उस विशेष प्रोटीन की तलाश में पश्चिमी धब्बा करना संभव नहीं होगा। इसके अलावा, शोधकर्ता यह निर्धारित करना चाह सकते हैं कि क्या किसी प्रोटीन को किसी तरह से संशोधित किया गया है - यदि इसे फॉस्फोराइलेट किया गया है (एक था) फॉस्फेट समूह से जुड़ा हुआ है), उदाहरण के लिए - और पश्चिमी धब्बा तकनीक के साथ उन्हें संशोधित करने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है प्रोटीन।

वेस्टर्न ब्लॉट को ठीक से करना और अच्छे परिणाम प्राप्त करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है, इसलिए कर्मचारियों को अच्छी तरह से प्रशिक्षित होना चाहिए। इसमें और बहुत कुछ के रूप में, अनुभव शायद सबसे अच्छा शिक्षक है; एक अनुभवी तकनीशियन के लिए भी, हालांकि, एक पश्चिमी धब्बा समय लेने वाला है। उदाहरण के लिए, प्रयोग के जेल वैद्युतकणसंचलन भाग को चलने में आमतौर पर एक से दो घंटे का समय लगेगा। अन्य कार्यों को किया जा सकता है, जबकि जेल चल रहा है, लेकिन प्रयोग अभी भी परिणाम प्राप्त करने में काफी समय लेता है।

एंटीबॉडी कभी-कभी कुछ ऑफ-टारगेट बाइंडिंग प्रदर्शित कर सकते हैं, जो खराब परिणाम दे सकते हैं। इसके अलावा, पश्चिमी सोख्ता के साथ, आप एक विशिष्ट प्रोटीन के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग करते हैं, इसलिए आपके परिणाम केवल आपको बताएंगे कि क्या वह प्रोटीन मौजूद था। उच्च-रिज़ॉल्यूशन मास स्पेक्ट्रोमेट्री, इसके विपरीत, एक नमूने में मौजूद सभी प्रोटीनों को प्रकट करता है, और शास्त्रीय पश्चिमी सोख्ता के विपरीत यह मात्रात्मक है। बेशक, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि मास स्पेक्ट्रोमेट्री पश्चिमी सोख्ता की तुलना में अधिक महंगा और तकनीकी रूप से उपयोग करने के लिए अधिक चुनौतीपूर्ण है।