टीए क्लोनिंग क्या है?

टीए क्लोनिंग पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) उत्पादों को सबक्लोनिंग करने का एक सरल और सुविधाजनक तरीका है। "टीए" "थाइमिन" और "एडेनिन" के लिए छोटा है। यह क्लोनिंग तकनीक लिगेज की उपस्थिति में एडेनिन को संकरण करने के लिए थाइमिन की क्षमता का उपयोग करती है। पारंपरिक सबक्लोनिंग पद्धति के विपरीत, प्रतिबंध एंजाइमों का उपयोग नहीं किया जाता है। इसके बजाय, पीसीआर उत्पादों को टैक पोलीमरेज़ एंजाइम का उपयोग करके प्रवर्धित किया जाता है।

टीए क्लोनिंग विधि पीसीआर उत्पाद के प्रत्येक छोर पर कुछ डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड ओवरहांग की टर्मिनल ट्रांसफरेज गतिविधि का उपयोग करती है।

इस पीसीआर उत्पाद को प्लास्मिड वेक्टर में क्लोन करने के लिए सिंगल, तीन प्राइम-टी (3'-टी) ओवरहैंग्स के साथ एक रैखिक क्लोनिंग वेक्टर का उपयोग किया जाता है जिसे टी-वेक्टर कहा जाता है। पीसीआर उत्पाद को इस वेक्टर के साथ उच्च अनुपात में मिलाया जाता है।

मिश्रण में डीएनए लिगेज (T4 लिगेज) मिलाया जाता है, जो दो उत्पादों को संकरण और जुड़ने में सक्षम बनाता है।

टीए क्लोनिंग रेखीयकृत वेक्टर में पीसीआर उत्पादों को सबक्लोनिंग करने का एक सुविधाजनक तरीका है, और यह पारंपरिक सबक्लोनिंग विधियों की तुलना में बहुत सरल और तेज है। चूंकि यह विधि प्रतिबंध एंजाइमों का उपयोग नहीं करती है, इसलिए बिना प्रतिबंध एंजाइम साइटों वाले उत्पादों को क्लोन किया जा सकता है।

एक नुकसान यह है कि टीए क्लोनिंग किट बहुत महंगी हैं और इसलिए, उनका उपयोग सीमित है। इसके अलावा, कोई दिशात्मक क्लोनिंग नहीं है; इसलिए विपरीत दिशा में क्लोनिंग की संभावना अधिक होती है।

कई निर्माता टीए क्लोनिंग किट बेचते हैं। कुछ इंविट्रोजन, क्यूएजेन और प्रीमियर बायोसॉफ्ट हैं।