पश्चिमी धब्बा परीक्षण, जिसे इम्युनोब्लॉटिंग भी कहा जाता है, एक प्रोटीन मिश्रण के भीतर एक विशिष्ट प्रोटीन के लिए एक परीक्षण है। पश्चिमी धब्बा परीक्षण जेल-वैद्युतकणसंचलन या एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) परीक्षण के बाद किया जाता है, और यह विशिष्ट प्रोटीन की पहचान करने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग करता है।
सोडियम डोडेसिल सल्फेट पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस-पेज) पश्चिमी धब्बा में उपयोग के लिए प्रोटीन को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला एक सामान्य परीक्षण है। प्रोटीन वजन और विद्युत गुणों से अलग हो जाते हैं क्योंकि वे एक जेल मैट्रिक्स के माध्यम से आगे बढ़ते हैं।
एलिसा परीक्षण परीक्षण सतह बनाने के लिए एक ठोस सतह से जुड़े एंजाइम या एंटीबॉडी का उपयोग करता है। एक नमूना फिर परीक्षण सतह पर जोड़ा जाता है। एंटीबॉडी या एंजाइम प्रोटीन से प्रतिक्रिया या संलग्न होना सकारात्मक परिणाम दर्शाता है।
पश्चिमी धब्बा परीक्षण जेल वैद्युतकणसंचलन के बाद किया जाता है। अलग किए गए प्रोटीन को नाइट्रोसेल्यूलोज या नायलॉन झिल्ली पर स्थानांतरित (या ब्लॉटेड) किया जाता है और विशिष्ट एंटीबॉडी द्वारा पहचाना जाता है जो एक माध्यमिक प्रोटीन द्वारा टैग किए जाते हैं।
पश्चिमी धब्बा परीक्षण का उपयोग जेल-वैद्युतकणसंचलन या एलिसा परीक्षणों से सकारात्मक परिणामों की पुष्टि करने के लिए किया जाता है। पश्चिमी धब्बा परीक्षण अधिक विशेष रूप से प्रोटीन की पहचान कर सकता है और झूठी सकारात्मकता को खारिज कर सकता है।