आपके शिक्षक आपको बैक्टीरिया का एक नमूना देते हैं और आपसे पूछते हैं: इस नमूने में कितने व्यवहार्य सूक्ष्मजीव हैं? इसका क्या मतलब है, और आप इसे कैसे समझते हैं? एक विधि है की संख्या ज्ञात करना कॉलोनी बनाने वाली इकाइयां(सीएफयू).
सीएफयू क्या हैं?
CFU किसी भी सूक्ष्मजीव की व्यक्तिगत कॉलोनियों की संख्या को संदर्भित करता है जो मीडिया की प्लेट पर विकसित होती हैं। बदले में यह मान प्रतिकृति करने में सक्षम बैक्टीरिया की संख्या का प्रतिनिधित्व करता है क्योंकि उन्होंने प्लेट पर कॉलोनियां बनाई हैं। एक CFU फॉर्मूला है जिसमें सैंपलिंग शामिल है।
आप सीएफयू कैसे ढूंढते हैं?
एक तरल नमूने में बैक्टीरिया की संख्या की गणना करना बहुत मुश्किल है। उनमें से बहुत सारे हैं, और वे बहुत छोटे हैं। इसके अलावा, उनमें से कुछ मृत हो सकते हैं और अन्य जीवित हो सकते हैं, और मरे हुओं को कुल में नहीं गिना जाना चाहिए। आप केवल में रुचि रखते हैं व्यवहार्य बैक्टीरिया, या बैक्टीरिया जो दोहरा सकते हैं। तो आप कैसे पता लगा सकते हैं कि आपके पास कितने बैक्टीरिया हैं?
इसी तरह से आप 1,000 लोगों का एक पोल ले सकते हैं और इसे 10,000 लोगों पर लागू करके यह पता लगा सकते हैं कि वे एक निश्चित विषय के बारे में कैसे सोच सकते हैं। आप कोशिश कर सकते हैं और अपने मूल नमूने का एक छोटा सा हिस्सा ले सकते हैं, यह पता लगा सकते हैं कि कितने बैक्टीरिया हैं उस हिस्से को, और फिर अनुमानित करने के लिए गणना करें कि मूल में कितने हो सकते हैं नमूना।
CFU खोजने के लिए Dilutions का उपयोग करना
किसी दिए गए नमूने का CFU खोजने की प्रक्रिया में पहले उस नमूने को पतला करना शामिल है। फिर तनुकरणों को सही वृद्धि माध्यम के साथ प्लेटों पर चढ़ाया जाता है। एकाधिक तनुकरण अक्सर एक अच्छा विचार है क्योंकि मूल नमूना बहुत केंद्रित हो सकता है।
एक निश्चित समय के लिए बैक्टीरिया को प्लेटों पर बढ़ने की अनुमति देने के बाद, व्यक्तिगत कॉलोनियां प्लेट पर गिने जाते हैं। यदि नमूना बहुत अधिक केंद्रित था, तो अलग-अलग कॉलोनियों के बजाय आपको बैक्टीरिया के विकास से आच्छादित एक बड़ा क्षेत्र दिखाई देगा जिसे a कहा जाता है लॉन. इसका मतलब है कि आपको अपने नमूने को और पतला करना चाहिए और फिर से बढ़ने का प्रयास करना चाहिए ताकि आप अलग-अलग कॉलोनियों को देख सकें।
चूंकि अलग-अलग कॉलोनियां एक ही बैक्टीरिया से आती हैं जो कई बार खुद को दोहराता है, केवल ये ही सीएफयू की ओर गिनती करते हैं।
सीएफयू खोजने के लिए प्रायोगिक प्रक्रिया
CFU गणना करने के लिए dilutions का उपयोग करने का एक उदाहरण इस प्रकार हो सकता है: सबसे पहले, आपके शिक्षक द्वारा आपको दिए गए प्रारंभिक नमूने से, आप 1 mL लें और इसे प्लेट करें। अगले दिन आप देखते हैं कि बैक्टीरिया का एक लॉन है। इसका मतलब है कि आप सीएफयू की संख्या की गणना नहीं कर सकते। अगला कदम कुछ कमजोर पड़ने वाला है।
सबसे पहले, आप 1 mL नमूना लें और इसे 9 mL लिक्विड मीडिया में पतला करें। चूंकि तनुकरण नौ भागों के लिए एक भाग का नमूना है, इसलिए इसे 1:10 कमजोर पड़ने के रूप में जाना जाता है। फिर, आप 1:10 कमजोर पड़ने का 1 एमएल लें और उसे 9 एमएल लिक्विड मीडिया में जोड़ें। यह कमजोर पड़ना 1:100 कमजोर पड़ने वाला है। अंत में आप 1:100 कमजोर पड़ने के 1 एमएल लेकर और तरल मीडिया के 9 एमएल जोड़कर 1:1,000 कमजोर पड़ने लगते हैं। प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए, अब आपके पास 10 एमएल पतला जीवाणु संस्कृति है।
किए गए dilutions, आप प्लेटों पर dilutions के ०.५ मिलीलीटर प्लेट करते हैं । उन प्लेटों को लेबल करना सुनिश्चित करें जिनके साथ कमजोर पड़ने पर चढ़ाया गया था।
अगले दिन आप वापस आते हैं और देखते हैं कि सभी प्लेटों पर कुछ अलग-अलग कॉलोनियां हैं। आप बीच में एक प्लेट चुनना चाहते हैं 30 और 300 कॉलोनियां. आप देखते हैं कि 1:1,000 कमजोर पड़ने वाली प्लेट में लगभग 10 कॉलोनियां हैं, इसका मतलब है कि आपने नमूने को अधिक पतला कर दिया है। वह प्लेट सीएफयू खोजने में मददगार नहीं होगी।
1:10 कमजोर पड़ने वाली प्लेट में कई कॉलोनियां हैं, शायद 300 से अधिक। उस स्थिति में आप १:१०० प्लेट पर जा सकते हैं। आप इस प्लेट पर कॉलोनियों को गिनें और देखें कि इसमें 179 कॉलोनियां हैं। इसका मतलब है कि १:१०० कमजोर पड़ने के ०.५ एमएल में १७९ सीएफयू होता है। लेकिन मूल नमूने के बारे में क्या?
सीएफयू गणना क्या है?
अब जब आपके पास कुछ डेटा है, तो आप मूल नमूने में CFU गणना कर सकते हैं।
1. आपके द्वारा चढ़ाया गया राशि (०.५ एमएल) लें और कमजोर पड़ने वाले कारक (०.०१) से गुणा करके ०.००५ प्राप्त करें। आपको ऐसा कमजोर पड़ने वाले कारक को खोजने के लिए करना चाहिए जिससे आपका CFU काउंट निकला। यहां, 1:100 कमजोर पड़ने के आधा मिलीलीटर ने आपको सीएफयू की गणना करने की अनुमति दी।
2. ३५,८०० सीएफयू उपज के लिए चरण १ (०.००५) के परिणाम से सीएफयू को कमजोर पड़ने (१७९) से विभाजित करें ।
इसका मतलब है कि मूल 1 एमएल नमूना जो पतला किया गया था उसमें 35,800 सीएफयू है। इसे कहने का दूसरा तरीका यह है कि मूल नमूने में 35,800 CFU/mL है।
किसी दिए गए नमूने में कितने बैक्टीरिया, कवक या कोई सूक्ष्मजीव हैं, यह पता लगाने के लिए CFU एक बेहतरीन उपकरण है। यहां वर्णित चढ़ाना विधि बहुत केंद्रित नमूनों या जीवों के लिए विशेष रूप से सहायक है जो तरल संस्कृति में अच्छी तरह से विकसित नहीं होते हैं।