सूक्ष्म जीवविज्ञानी अध्ययन करते हैं सूक्ष्मजीवों की विशेषताएं जैसे शैवाल, प्रोटोजोआ, बैक्टीरिया, कवक और वायरस माइक्रोस्कोप का उपयोग करते हैं। जबकि कुछ जीवों जैसे प्रोटोजोआ और खमीर कोशिकाओं को गीले माउंट का उपयोग करके देखना आसान होता है, जीवाणु कोशिकाओं को धुंधला होने की आवश्यकता होती है। बैक्टीरिया कोशिकाओं और सेलुलर संरचनाओं के बेहतर दृश्य के लिए वैज्ञानिकों ने ग्राम धुंधला, एसिड-फास्ट धुंधला और फ्लोरोसेंट धुंधला जैसे कई तरीकों का विकास किया। ऐसी धुंधला विधियों का उपयोग करके, संरचनात्मक विशेषताओं की पहचान करना संभव है जो बैक्टीरिया को वर्गीकृत करने में मदद करते हैं।
बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन
जीवाणु जीव इतने छोटे होते हैं कि उनमें से अधिकांश केवल एक माइक्रोस्कोप के नीचे दिखाई देते हैं जिसमें a आवर्धन शक्ति 1000X का। हालांकि, केवल आकार का आवर्धन पर्याप्त मात्रा में स्पष्टता प्रदान नहीं करता है, ताकि दृश्य के लिए आवश्यक स्पष्टता प्रदान करने के लिए बैक्टीरिया को अवलोकन से पहले दाग दिया जाना चाहिए।
पहचान और वर्गीकरण
बैक्टीरिया के प्रकारों के बीच अंतर करने के लिए धुंधला बैक्टीरिया को डिफरेंशियल स्टेनिंग के रूप में जाना जाता है। ग्राम दाग एक ऐसा विभेदक दाग है जो बैक्टीरिया के बीच उनकी कोशिका भित्ति की सामग्री के आधार पर अंतर करता है। इस विधि में, जीवाणु कोशिकाएं एक बैंगनी रंग लेने के लिए क्रिस्टल वायलेट दाग के साथ प्रतिक्रिया करती हैं। डी-स्टेनिंग एजेंट जोड़ने पर, कुछ जीवाणु कोशिकाएं रंग खो देती हैं जबकि अन्य नहीं। सफ्रेनिन दाग जोड़ने पर, विरक्त कोशिकाएं लाल दिखाई देने के लिए दाग को पकड़ लेती हैं जबकि जीवाणु कोशिकाएं जो रंग नहीं खोती हैं वे बैंगनी रहती हैं। लाल रंग ग्रहण करने वाली जीवाणु कोशिकाएं ग्राम ऋणात्मक जीव कहलाती हैं और जो रंग ग्रहण नहीं करती उन्हें ग्राम धनात्मक जीव के रूप में वर्गीकृत किया जाता है। ग्राम स्टेनिंग संक्रमण में शामिल बैक्टीरिया की प्रारंभिक पहचान के लिए एक तेज़ तरीका प्रदान करता है। इसी तरह, एसिड-फास्ट स्टेनिंग प्रक्रिया विशेष रूप से माइकोबैक्टीरिया नामक बैक्टीरिया के वर्ग से संबंधित जीवों की पहचान करने में मदद करती है, जैसे कि माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस।
व्यवहार्यता का पता लगाना
जीवाणु संवर्धन नमूनों में, जीवित जीवाणु कोशिकाओं की उपस्थिति का पता लगाना अक्सर महत्वपूर्ण होता है। फ्लोरोसेंट स्टेनिंग जैसे धुंधला तरीके यह पहचानने में मदद करते हैं कि संस्कृति कोशिकाएं व्यवहार्य हैं या नहीं। जीवित जीवाणुओं में 5-सायनो-2,3-डिटोलाइल टेट्राजोलियम क्लोराइड (सीटीसी) के दाग को एक डाई में बदलने की क्षमता होती है जो एक लाल प्रतिदीप्ति दिखाती है। इसलिए, जब सीटीसी से सना हुआ कल्चर ऐसे फ्लोरेसेंस का उत्सर्जन करता है, तो यह व्यवहार्य बैक्टीरिया की उपस्थिति को इंगित करता है। प्रोपीडियम आयोडाइड एक दाग है जो केवल गैर-जीवित कोशिकाओं पर कार्य करता है जिसमें क्षतिग्रस्त झिल्ली होती है, और इसलिए, मृत जीवाणु कोशिकाओं की पहचान करने में उपयोगी होती है।
सेलुलर संरचनाओं की पहचान
धुंधला कई सेलुलर संरचनाओं को स्पष्ट रूप से देखने की एक विधि प्रदान करता है। उदाहरण के लिए, फ्यूलजेन स्टेनिंग विधि बैक्टीरिया कोशिकाओं के भीतर नाभिक की पहचान की अनुमति देती है जबकि अल्बर्ट का दाग मेटाक्रोमैटिक कणिकाओं की कल्पना करने में उपयोगी होता है। इसी तरह, सिल्वर इंप्रेग्नेशन तकनीक स्पाइरोकेट्स की पहचान करने की अनुमति देती है। रयू के दाग से दाग लगने पर फ्लैगेल्ला का निरीक्षण करना आसान होता है। मैलाकाइट हरे रंग का धुंधलापन बैक्टीरिया के बीजाणुओं की पहचान करने में मदद करता है।
