एचपीएलसी के मूल घटक

उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी मिश्रण के प्रयोगशाला विश्लेषण के लिए एक तकनीक है। यह एक कुशल प्रकार की क्रोमैटोग्राफी है जो एक स्तंभ के माध्यम से मिश्रण के नमूने को आगे बढ़ाने के लिए केवल गुरुत्वाकर्षण के बजाय उच्च दबाव का उपयोग करता है। एक नमूना इंजेक्ट किया जाता है, फिर एक पंप जिसमें उच्च मात्रा में दबाव होता है, नमूने को एक भरे हुए कॉलम के साथ स्थानांतरित करने में मदद करता है, जहां इसे अलग-अलग घटकों में अलग किया जाता है। परिणाम प्राप्त करने के लिए इस पृथक्करण का एक डिटेक्टर द्वारा विश्लेषण किया जाता है।

एचपीएलसी में इंजेक्शन लगाने के लिए, एक नमूना को पहले ध्रुवीय तरल विलायक में भंग किया जाना चाहिए, अधिमानतः ज्ञात एचपीएलसी स्पेक्ट्रा के साथ एक ताकि इसके डेटा को नमूने से अलग किया जा सके। नमूना युक्त तरल समाधान उपकरण में रखा जाता है और कॉलम में भेजा जाता है। इंजेक्शन साइट का वास्तविक स्थान उपकरणों के ब्रांड पर निर्भर करता है। ज्यादातर मामलों में, इंजेक्शन प्रक्रिया स्वचालित होती है, लेकिन कुछ मामलों में एक प्रयोगशाला कर्मचारी को एक छोटी सी सिरिंज सुई का उपयोग करके नमूना इंजेक्ट करना चाहिए।

एचपीएलसी इकाई का पंप घटक आवश्यक है क्योंकि यह दबाव प्रदान करता है जो स्तंभ के माध्यम से नमूना को आगे बढ़ाता है। पंप की ताकत अलग-अलग होती है, लेकिन एक शक्तिशाली पंप 6,000 साई या पाउंड प्रति वर्ग इंच तक का दबाव पैदा कर सकता है, जो नमूना इंजेक्शन के बाद लगाया जाता है। यह नमूना को केवल गुरुत्वाकर्षण बल का उपयोग करके टपकने की तुलना में स्तंभ से अधिक तेज़ी से और कुशलता से गुजरने की अनुमति देता है।

एक पंप द्वारा कॉलम से गुजरने वाले नमूने की बढ़ी हुई गति साधारण तरल क्रोमैटोग्राफी में उपयोग किए जाने वाले कॉलम की तुलना में एक अलग प्रकार के कॉलम के उपयोग की अनुमति देती है। कॉलम में पैकिंग सामग्री का कण आकार बहुत छोटा हो सकता है, जो सतह क्षेत्र को बढ़ाता है और इसलिए कॉलम के साथ नमूने की बातचीत में सहायता करता है। अधिकांश एचपीएलसी कॉलम ध्रुवीयता के माध्यम से काम करते हैं। नमूना एक ध्रुवीय विलायक में घुल जाता है, और स्तंभ बड़े पैमाने पर गैर-ध्रुवीय हाइड्रोकार्बन से बना होता है। नमूना अणु के ध्रुवीय भाग स्तंभ से बहुत तेज़ी से गुजरते हैं क्योंकि वे मुख्य रूप से के साथ बातचीत कर रहे हैं विलायक, जबकि नमूने के गैर-ध्रुवीय घटक स्तंभ में बने रहते हैं, जिससे स्तंभ के साथ कमजोर अंतःक्रिया होती है अवयव। इसलिए, अधिकांश ध्रुवीय से अधिकांश गैर-ध्रुवीय के क्रम में नमूने के घटक स्तंभ से बाहर आते हैं।

उपयोग किए जा रहे एचपीएलसी उपकरण के प्रकार के आधार पर डिटेक्टर भी भिन्न होते हैं। हालांकि, अधिकांश एक ही मूल तरीके से कार्य करते हैं। अलग-अलग नमूना घटकों पर पराबैंगनी प्रकाश का एक स्रोत चमकता है क्योंकि वे स्तंभ से बाहर आते हैं। अधिकांश कार्बनिक यौगिक एक निश्चित मात्रा में प्रकाश को अवशोषित करते हैं, इसलिए जैसे ही वे लागू प्रकाश किरण से गुजरते हैं, एक डिटेक्टर यह उठा सकता है कि कितना प्रकाश अवशोषित होता है। डिटेक्टर उस क्रम के आधार पर घटकों के अवधारण समय को भी रिकॉर्ड करता है जिसमें वे कॉलम से निकलते हैं। नमूना के घटकों की सटीक प्रकृति को निर्धारित करने के लिए इस आउटपुट का विश्लेषण शिखर क्षेत्र के आधार पर किया जा सकता है।