TA-kloonaus on yksinkertainen ja kätevä menetelmä polymeraasiketjureaktiotuotteiden (PCR) subkloonaukseen. "TA" on lyhenne sanoista "tymiini" ja "adeniini". Tämä kloonausmenetelmä hyödyntää tymiinin kykyä hybridisoitua adeniiniin ligaasien läsnä ollessa. Rajoitusentsyymejä ei käytetä, toisin kuin perinteinen alakloonausmenetelmä. Sen sijaan PCR-tuotteet monistetaan käyttämällä Taq-polymeraasientsyymejä.
Menetelmä
TA-kloonausmenetelmä käyttää tietyn deoksiribonukleiinihapon ulkoneman terminaalista transferaasiaktiivisuutta PCR-tuotteen molempiin päihin.
Lineaarisoitua kloonausvektoria, jossa on yksi, kolme prime-T (3'-T) -uloketta, kutsutaan T-vektoriksi, tämän PCR-tuotteen kloonaamiseksi plasmidivektoriksi. PCR-tuote sekoitetaan tämän vektorin kanssa suuressa osassa.
DNA-ligaasi (T4-ligaasi) lisätään seokseen, mikä mahdollistaa näiden kahden tuotteen hybridisoitumisen ja liittymisen.
Hyödyt ja haitat
TA-kloonaus on kätevä menetelmä PCR-tuotteiden alakloonaamiseksi linearisoidussa vektorissa, ja se on paljon yksinkertaisempi ja nopeampi kuin perinteiset alakloonausmenetelmät. Koska tässä menetelmässä ei käytetä restriktioentsyymejä, tuotteet, joissa ei ole restriktioentsyymikohtia, voidaan kloonata.
Haittana on, että TA-kloonauspaketit ovat erittäin kalliita ja siten niiden käyttö on rajallista. Lisäksi ei ole suunnattua kloonausta; joten kloonaamisen todennäköisyys vastakkaiseen suuntaan on suurempi.
TA-kloonaussarjat
Useat valmistajat myyvät TA-kloonaussarjoja. Jotkut ovat Invitrogen, QIAGEN ja Premier Biosoft.