Opettajasi antaa sinulle näytteen bakteereista ja kysyy: Kuinka monta elinkelpoista mikro-organismia on tässä näytteessä? Mitä tämä tarkoittaa, ja miten voit selvittää sen? Yksi tapa on löytää luku siirtomaa muodostavat yksiköt(CFU).
Mitä ovat CFU?
CFU viittaa minkä tahansa mikro-organismin yksittäisten pesäkkeiden lukumäärään, jotka kasvavat alustalla. Tämä arvo puolestaan edustaa replikoitumiskykyisten bakteerien lukumäärää, kun ne ovat muodostaneet pesäkkeitä levylle. CFU-kaava sisältää näytteenoton.
Kuinka löydät CFU: n?
Bakteerien määrän laskeminen nestemäisessä näytteessä on erittäin vaikeaa. Niitä on liian paljon, ja ne ovat liian pieniä. Lisäksi jotkut heistä voivat olla kuolleita ja toiset elossa, eikä kuolleita pitäisi laskea kokonaismäärään. Sinua kiinnostaa vain elinkelpoinen bakteerit tai bakteerit, jotka voivat replikoitua. Joten miten voit selvittää, kuinka monta bakteeria sinulla on?
Samalla tavalla kuin voit ottaa kyselyn 1000 ihmisestä ja soveltaa sitä 10000 ihmiseen selvittääksesi, miten he voisivat ajatella tiettyä aihetta. Voit yrittää ottaa pienen osan alkuperäisestä näytteestäsi ja selvittää, kuinka monta bakteeria siellä on kyseisen osan, ja laske sitten likimääräiseksi, kuinka monta alkuperäisessä saattaa olla näyte.
Laimennusten käyttäminen CFU: n etsimiseen
Menettely tietyn näytteen CFU: n löytämiseksi käsittää ensin näytteen laimentamisen. Laimennukset levitetään sitten levyille, joissa on oikea kasvualusta. Useita laimennoksia on usein hyvä idea, koska alkuperäinen näyte voi olla hyvin konsentroitu.
Annettuasi bakteerien kasvaa levyillä tietyn ajan, yksittäiset pesäkkeet lasketaan lautaselle. Jos näyte oli liian väkevä, yksittäisten pesäkkeiden sijasta näet suuren alueen, joka on peitetty bakteerikasvulla, jota kutsutaan a nurmikko. Tämä tarkoittaa sitä, että sinun tulisi edelleen laimentaa näytettäsi ja yrittää kasvaa uudelleen, jotta näet yksittäiset pesäkkeet.
Koska yksittäiset pesäkkeet ovat peräisin yhdestä bakteerista, joka lisääntyy monta kertaa, vain nämä lasketaan CFU: han.
Kokeellinen menetelmä CFU: n löytämiseksi
Esimerkki laimennusten käytöstä CFU-laskennassa voisi olla seuraava: Ensinnäkin, otat opettajan antamasta alkuperäisestä näytteestä 1 ml ja lautaset sen. Seuraavana päivänä näet, että siellä on bakteerien nurmikko. Tämä tarkoittaa, että et voi laskea CFU: n määrää. Seuraava vaihe on laimennusten tekeminen.
Ensin otat 1 ml näytettä ja laimennat sen 9 ml: aan nestemäistä väliainetta. Koska laimennus on yksi osa näytettä yhdeksään osaan laimenninta, sitä kutsutaan laimennukseksi 1:10. Ota sitten 1 ml laimennosta 1:10 ja lisää se 9 ml: aan nestemäistä väliainetta. Tämä laimennus on 1: 100 laimennus. Lopuksi laimennetaan 1: 1 000 ottamalla 1 ml laimennosta 1: 100 ja lisäämällä 9 ml nestemäistä väliainetta. Kutakin laimennusta varten sinulla on nyt 10 ml laimennettua bakteeriviljelmää.
Laimennukset tehty, lautaset 0,5 ml laimennuksista levyille. Varmista, että merkitään levyt, joille laimennus laimennettiin.
Seuraavana päivänä palaat takaisin ja näet, että kaikilla levyillä on joitain yksittäisiä pesäkkeitä. Haluat valita lautasen välistä 30 ja 300 pesäkettä. Näet, että laimennuslevyllä 1: 1 000 on noin 10 pesäkettä, mikä tarkoittaa, että näytettä laimennetaan liikaa. Tuo levy ei ole hyödyllinen CFU: n löytämisessä.
Laimennuslevyllä 1:10 on monia pesäkkeitä, ehkä yli 300. Siinä tapauksessa voit mennä levylle 1: 100. Laske pesäkkeet tällä levyllä ja huomaat, että siinä on 179 pesäkettä. Tämä tarkoittaa, että 0,5 ml 1: 100-laimennosta sisältää 179 CFU: ta. Mutta entä alkuperäinen näyte?
Mikä on CFU-laskenta?
Nyt kun sinulla on joitain tietoja, voit tehdä CFU-laskennan alkuperäisessä näytteessä.
1. Ota levittämäsi määrä (0,5 ml) ja kerro laimennuskertoimella (0,01), jolloin saadaan 0,005. Sinun on tehtävä tämä löytääksesi laimennuskerroin, joka antoi CFU-lukemasi. Tässä puolen millilitran 1: 100-laimennosta voit laskea CFU: n.
2. Jaa CFU laimennoksesta (179) vaiheen 1 tuloksella (0,005), jolloin saadaan 35 800 CFU.
Tämä tarkoittaa, että alkuperäinen 1 ml laimennettua näytettä sisältää 35800 CFU: ta. Toinen tapa laittaa tämä on sanoa, että alkuperäisessä näytteessä on 35800 CFU / ml.
CFU on loistava työkalu löytääksesi kuinka monta bakteeria, sientä tai mikro-organismia on tietyssä näytteessä. Tässä kuvattu pinnoitusmenetelmä on erityisen hyödyllinen hyvin konsentroiduille näytteille tai organismeille, jotka eivät kasva hyvin nesteviljelmässä.