Ravintoagar on eräänlainen yleiskäyttöinen monimutkainen väliaine, jota käytetään pääasiassa erilaisten mikro-organismien viljelyyn.
Monimutkainen materiaali mikrobiologia ovat kasvualustoja, jotka koostuvat useista käytettävissä olevista ravintoaineista ja proteiinimolekyyleistä tuntemattomina pitoisuuksina. Ravintoagaria käytetään epäpuhtaiden mikrobien, kuten bakteerien ja hiivan, viljelyyn.
Mikä kasvaa ravintoagarilla?
Mikro-organismit tarvitsevat ruokaa, vettä ja sopivan ympäristön selviytyäkseen ja kasvakseen. Ravinteiden agar tarjoaa nämä resurssit monentyyppisille mikrobeille, alkaen sienet kuten hiiva ja hometta tavallisille bakteereille, kuten Streptococcus ja Staphylococcus.
Mikrobeja, joita voidaan kasvattaa monimutkaisissa väliaineissa, kuten ravinteiden agarissa, voidaan kuvata ei-herkät organismit. Tahattomat organismit ovat mikrobeja, jotka pystyvät kasvamaan ja menestymään ilman erityisiä ravinto- tai ympäristöolosuhteita.
Joitakin bakteereita ei voida kasvattaa ravintoagar-väliaineella.
Nopeat organismit (nirso bakteerit) saattaa tarvita hyvin spesifistä ravinnonlähdettä, jota ei ole ravinteiden agarissa. Yksi esimerkki ahkerasta organismista on Treponema pallidum, bakteerit, jotka aiheuttavat kuppa. Tutkijat ovat yrittäneet epäonnistuneesti kasvattaa tätä bakteeria viljelmässä yli 100 vuoden ajan.Ravintoagaria voidaan käyttää mikro-organismien viljelyyn useisiin tarkoituksiin. Yksi käyttö on viljelemättömien organismien spesifisten pesäkkeiden viljely ja ylläpito tieteellistä tutkimusta tai tunnistamista varten. Toinen käyttö on havaita ja kvantifioida mahdollisesti haitallisten aineiden esiintyminen bakteerit tai muut mikrobit vedessä, viemärissä, äyriäisissä, lihassa, maitotuotteissa ja muissa elintarvikkeissa.
Kasvualusta on pidettävä steriilinä, jotta voidaan varmistaa, että viljelyyn tarkoitetut mikrobit kasvavat vain, eivätkä ne kasva kasvualustan saastumisen seurauksena.
Ravinteiden agar-ainesosat
Pää ravintoaineen agarissa olevat ainesosat ovat peptoni, naudanlihauute ja agar. Nämä aineosat jauhetaan ja lisätään sitten tislattuun veteen. Ravinteiden erityinen koostumus agar voi vaihdella hieman käytettyjen ainesosien valmistajan ja lähteen mukaan.
Valmistetun ravintoagar-väliaineen koostumus on 0,5 prosenttia peptonia, 0,3 prosenttia naudanlihauutetta (tai hiivauutetta), 1,5 prosenttia agaria ja 0,5 prosenttia natriumkloridia.
Määritellä agar
Määritä agar ajattelemalla monimutkaista hiilihydraattia, joka on peräisin meren punalevistä ja joka toimii kiinteyttävänä aineena ravintoalustassa. Sillä ei ole ravintoarvoa viljeltäville mikrobeille.
Agar-geelit lämpötilassa 113 Fahrenheit (45 astetta) ja sulavat 203 Fahrenheit-asteessa (95 Celsius-astetta). Agar sisältää myös elintarvikelaatuisia lajikkeita, joita voidaan käyttää sakeuttavana aineosana keittoihin, hyytelöihin ja muihin elintarvikkeisiin.
Peptonin määritelmä
peptonin määritelmä on liukoinen proteiini, joka muodostuu proteiinin hajoamisen alkuvaiheessa pilkkomisen aikana. Se valmistetaan sulattamalla proteiinimateriaalit, kuten liha, gelatiini ja kaseiini, osittain käyttämällä happoja tai entsyymit.
Ravinteiden agar-väliaineessa olevan peptonin tarkoitus on tarjota ensisijainen orgaanisen typen lähde kasvavalle mikrobiviljelmälle, ja se voi olla myös hiilihydraattien ja vitamiinien lähde. Peptonin tarkka koostumus ravintoalustassa vaihtelee proteiinilähteen ja pilkkomismenetelmän mukaan.
Naudanlihauute
naudanlihauute ravintoagar-väliaineen valmistukseen käytetään seosta vesiliukoisista eläinkudoksen hiukkasista, hiilihydraateista, orgaanisista typpiyhdisteistä, vitamiineista ja suolasta.
Hiivauutetta voidaan käyttää myös ravinteiden agarin valmistamiseen ja se tarjoaa samanlaisia yhdisteitä. Naudanlihauuteyhdisteiden tarkoituksena on auttaa ravintoagar-väliaineessa viljeltävien bakteerien kasvussa.
Tislattu vesi
Tislattu vesi käytetään tyypillisesti ravintoagar-väliaineen valmistamiseen. Tislattu vesi on vettä, joka on käsitelty liuenneiden epäpuhtauksien ja mineraalien poistamiseksi.
Ravinteiden agar-väliaineessa oleva tislattu vesi on välttämätöntä siellä kasvavien mikro-organismien elämänprosesseille, samoin kuin vesi on välttämätöntä kaikkien elävien olentojen elämänprosesseille. Natriumkloridin lisääminen seokseen tekee viljelyympäristön samanlaiseksi kuin sytoplasma.
Ravintoagar-väliaineen valmistaminen
Oikein valmistaa ravinteiden agarseos bakteeriviljelyn osalta on tärkeää viitata ravintovalmistajan antamiin erityisiin ohjeisiin. Jotkut ainesosat tai määrät voivat vaihdella hieman ravintoagarin lähteestä riippuen.
- Liuotetaan 28 grammaa ravintoagar-jauhetta litraan tislattua vettä.
- Kuumenna seos kiehuvaksi jatkuvasti sekoittaen. Jatka kiehumista ja sekoita seosta noin minuutin ajan tai kunnes kaikki jauhe on liuennut.
- Autoklaavissa liuennut seos 15 minuutin ajan 249,8 Fahrenheit-astetta (121 Celsius-astetta).
- Anna agarseoksen jäähtyä hieman. Annostele levyiksi tai putkiksi. Anna kiinteytyä.
- Vaihda kannet ja säilytä viileässä, pimeässä ja steriilissä ympäristössä, kuten jääkaapissa. Kauppa agar-levyt (Petri-astiat) ylösalaisin estääksesi kosteuden muodostumisen väliaineeseen.
Valmistetun ravintoagar-väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 6,8. Väliaineen on oltava vaalean keltaista väriä ja kiinteän gelatiinin konsistenssin. Valmistetun ravintoagar-väliaineen tulisi kestää jääkaapissa enintään kaksi vuotta, ellei väliaineen ulkonäössä tapahdu merkittävää muutosta, joka viittaa kontaminaatioon.