HPLC tarjoaa nopean, automatisoidun ja erittäin tarkan menetelmän tiettyjen kemiallisten komponenttien tunnistamiseksi näytteessä, mutta se voi olla kallista, monimutkaista eikä toimi kaikille näytteille. Lääketieteelliset, rikostekniset, ympäristö- ja valmistuslaboratoriot käyttävät tekniikkaa näytteen sisältämien kemikaalien kvantifiointiin ja erottamiseen. HPLC: llä on sekä etuja että haittoja muihin tekniikoihin verrattuna.
HPLC ja vastaavat tekniikat
Kuten muutkin kromatografiamuodot, HPLC sallii kemiallisten ainesosien erottamisen käyttämällä liikkuvaa faasia ja paikallaan olevaa faasia. Liikkuva faasi on nestemäinen ja kiinteä faasi kiinteä. Koska eri komponentit liikkuvat eri nopeuksilla, ne erottuvat toisistaan. Vaihtoehtoisiin tekniikoihin kuuluu kapillaarielektroforeesi, jossa aineet kulkeutuvat sähköliuosten läpi ja muut kromatografiset menetelmät, kuten kiinteäfaasiuutto, kaasukromatografia ja ohut kerros kromatografia.
Nopeus, tehokkuus ja tarkkuus
Verrattuna muihin kromatografiatekniikoihin, kuten TLC, HPLC on erittäin nopea ja tehokas. Se käyttää pumppua painovoiman sijasta nestemäisen liuottimen pakottamiseksi kiinteän adsorbenttimateriaalin läpi, jolloin erilaiset kemialliset komponentit erottuvat, kun ne liikkuvat eri nopeuksilla. Prosessi voidaan saada päätökseen noin 10-30 minuutissa, ja se tuottaa korkean resoluution. Se on tarkka ja erittäin toistettavissa. Koska se on pitkälti automatisoitu, voidaan HPLC-perusajot suorittaa minimaalisella koulutuksella.
Kustannukset ja monimutkaisuus
Eduistaan huolimatta HPLC voi olla kallista, vaatii suuria määriä kalliita orgaanisia aineita. Tekniikat, kuten kiinteäfaasiuutto ja kapillaarielektroforeesi, voivat olla halvempia ja jopa nopeampia, varsinkin kun analysoidaan hyvässä valmistustavassa. Vaikka olemassa olevien HPLC-menetelmien käyttö on suhteellisen helppoa, ongelmien vianmääritys tai uusien menetelmien kehittäminen voi olla monimutkaista. Tämä johtuu suurelta osin erilaisten moduulien, sarakkeiden ja mobiilivaiheiden joukosta.
Herkkyys ja tarkkuus
Yleensä HPLC on monipuolinen ja erittäin tarkka kemiallisten komponenttien tunnistamisessa ja kvantifioinnissa. Monien vaiheiden mukana HPLC: n tarkkuus riippuu pitkälti siitä, että prosessi on automatisoitu ja siksi erittäin toistettavissa. HPLC: llä on alhainen herkkyys tietyille yhdisteille, eikä niitä voida havaita, koska ne adsorboituvat peruuttamattomasti. Haihtuvat aineet erotetaan paremmin kaasukromatografialla.