Keemikud kasutavad ühendite segude eraldamiseks kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat või HPLC-d. Üldiselt koosneb meetod proovi süstimisest kolonni, kus see seguneb ühe või mitme lahustiga. Erinevad ühendid adsorbeeruvad või "kleepuvad" kolonni erineval määral; ja kui lahusti surub ühendid läbi kolonni, väljub üks segu komponentidest kõigepealt kolonnist. Instrument tuvastab kolonnist väljumisel ühendid ja annab kromatogrammi, mis koosneb graafikust, mille retentsiooniaeg on x-teljel ja signaali intensiivsus detektorilt y-teljel. Kui ühendid väljuvad kolonnist, tekitavad nad kromatogrammis piigid. Üldiselt, mida kaugemal üksteisest ja kitsamad piigid kromatogrammis, seda suurem on eraldusvõime. Teadlased leiavad, et eraldusvõime 1,0 või suurem on piisav eraldatus.
Mõõtke kromatogrammil kahe kõrvuti asetseva piigi laiused, märkides, kus x-telje väärtused asuvad iga piigi põhjas. X-telg tähistab retentsiooniaega, mida mõõdetakse tavaliselt sekundites. Seega, kui tipp algab 15,1 sekundist ja lõpeb 18,5 sekundiga, on selle laius (18,5 - 15,1) = 3,4 sekundit.
Määrake retentsiooniajad, märkides ära aja, s.o asukoha x-teljel, mis vastab tippude maksimumide asukohtadele. See väärtus jääb tavaliselt umbes poolele kahe sammu laiuse arvutamiseks kasutatud väärtuse vahel. Näiteks 1. etapis toodud näite maksimaalne väärtus on umbes 16,8 sekundit.
Arvutage kahe piigi lahutusvõime R järgmise valemi abil:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
kus RT1 ja RT2 tähistavad piikide 1 ja 2 retentsiooniaegu ja W1 ja W2 tähistavad nende alustel võetud tippude laiusi. Jätkates näidet sammudest 2 ja 3, näitab ühe piigi retentsiooniaeg 16,8 sekundit ja laius 3,4 sekundit. Kui teise piigi retentsiooniaeg oli 21,4 sekundit laiusega 3,6 sekundit, oleks eraldusvõime järgmine:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Asjad, mida vajate
- HPLC kromatogramm
- Kalkulaator