Antud analüüsimeetod Western Western blot, mida kasutatakse konkreetse valgu kindlakstegemiseks antud proovis, kasutab ensüümi või fluorestsentsiga märgistatud primaarse antikeha võimet seonduda selle spetsiifilise antigeeniga. See on kolmeastmeline protsess, mis algab geelelektroforeesiga, millele järgneb membraani määrimine ja antikehadega sondeerimine. Valgu tuvastamine võib olla otsene või kaudne, viimases kasutatakse primaari vastu suunatud märgistatud sekundaarset antikeha. Ehkki seda aktsepteeritakse tavapärase valguanalüüsi tehnikana, on Western blotil nii piiranguid kui ka eeliseid.
Eelis: tundlikkus
Üks suurimaid argumente Western bloti kasuks on selle tundlikkus. Tänu oma võimele avastada proovist nii vähe kui 0,1 nanogrammi valku võib teoreetiliselt toimida ka meetodina tõhus varajane diagnostikavahend, mis tunneb patsiendi vähimatki viiruse või bakteri immunogeenset vastust proov. Kaudne western blot tugineb veelgi sellele tundlikkusele sekundaarsete antikehade võimest võimendada pildistamissüsteemi tuvastatud signaali intensiivsust. Suurem tundlikkus tähendab, et testimiseks on vaja vähem antikehi, mis vähendab oluliselt laborikulusid.
Eelis: spetsiifilisus
Western blot tehnika võlgneb oma spetsiifilisuse kahele suurele tegurile. Esiteks sorteerib geelelektroforees proovi erineva suuruse, laengu ja konformatsiooniga valkudeks. See protsess on iseenesest tohutu samm avastamise suunas, kuna geelis moodustunud ribad annavad juba vihjeid huvipakkuva valgu või polüpeptiidi suuruse kohta. Antikeha-antigeeni vastasmõju spetsiifilisus on teine suur tegur. Kuna spetsiifilised antikehad näitavad afiinsust spetsiifiliste valkude suhtes, saab protsess selektiivselt tuvastada sihtvalgu isegi 300 000 erineva valgu segus.
Puudus: altid valedele või subjektiivsetele tulemustele
Hoolimata tundlikkusest ja spetsiifilisusest võib western blot siiski ekslikke tulemusi anda. Valepositiivsed tulemused, kui antikeha reageerib soovimatu valguga, mis on sageli juhtub siis, kui HIV-testiga patsiendil on tuberkuloos või mitu parasiit infektsioonid. Vale-negatiivne võib seevastu kergesti tekkida, kui suurematele valkudele ei anta piisavalt aega membraanile korralikuks ülekandmiseks. Ebaõige määrimine ja töötlemine tekitab sageli viltu, pleekinud või isegi mitu riba, mistõttu testitulemused sõltuvad tehniku tõlgendusest.
Puudus: kõrge hind ja tehniline nõudlus
Western bloti maksumus on märgistatud antikehade, kvalifitseeritud analüütikute ja laboriseadmete suurte individuaalsete kulutuste liit. Õrn protsess, Western blotting nõuab valimi komponentide õigeks tuvastamiseks igas etapis täpsust. Väike viga reaktiivi kontsentratsioonis või inkubatsiooniperioodis võib olla kogu protsessi jaoks katastroofiline. Lõpuks võib tuvastamiseks ja pildistamiseks vajalik varustus - kemiluminestsents-, fluorestsents-, radioaktiivsed või laserdetektorisüsteemid - olla keskmise mikrobioloogiaüksuse jaoks liiga kallid.