TA kloonimine on lihtne ja mugav meetod polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) saaduste subkloonimiseks. "TA" on lühend tümiinist ja "adeniinist". See kloonimistehnika kasutab tümiini võimet hübridiseeruda adeniiniga ligaaside juuresolekul. Piiravaid ensüüme erinevalt traditsioonilisest subkloonimismeetodist ei kasutata. Selle asemel amplifitseeritakse PCR-saadused Taq polümeraaside ensüümide abil.
Meetod
TA kloonimismeetodis kasutatakse teatava deoksüribonukleiinhappe üleulatuva terminaalse transferaasi aktiivsust PCR toote mõlemas otsas.
Selle PCR saaduse kloonimiseks plasmiidivektorisse kasutatakse ühe lineaarset kloonimisvektorit, millel on üks kolm peamist T (3'-T) ülerippu, mida nimetatakse T-vektoriks. PCR produkt segatakse selle vektoriga suures koguses.
Segule lisatakse DNA ligaas (T4 ligaas), mis võimaldab kahel saadusel hübridiseeruda ja ühineda.
Eelised ja puudused
TA kloonimine on mugav meetod PCR-toodete subkloonimiseks lineariseeritud vektoris ning see on palju lihtsam ja kiirem kui traditsioonilised subkloonimismeetodid. Kuna selles meetodis ei kasutata restriktsiooniensüüme, saab kloonida tooteid, millel pole restriktsiooniensüümide saite.
Puuduseks on see, et TA kloonimiskomplektid on väga kallid ja seetõttu on nende kasutamine piiratud. Pealegi puudub suundkloonimine; seega on kloonimise tõenäosus vastupidises suunas suurem.
TA kloonimiskomplektid
Mitmed tootjad müüvad TA kloonimiskomplekte. Mõned on Invitrogen, QIAGEN ja Premier Biosoft.