Kuidas lahjendatud CFU-d arvutada

Teie õpetaja ulatab teile bakteriproovi ja küsib: kui palju selles proovis on elujõulisi mikroorganisme? Mida see tähendab ja kuidas saate sellest aru? Üks meetod on nende arvu leidmine kolooniaid moodustavad üksused(CFU).

CFU viitab mis tahes mikroorganismi üksikute kolooniate arvule, mis kasvavad söötme plaadil. See väärtus tähistab omakorda paljunemisvõimeliste bakterite arvu, kui nad on plaadile moodustanud kolooniad. On CFU valem, mis hõlmab proovide võtmist.

Bakterite arvu loendamine vedelas proovis on väga keeruline. Neid on liiga palju ja nad on liiga väikesed. Veelgi enam, mõned neist võivad olla surnud ja teised elus ning surnud ei tohiks koguarvu hulka arvestada. Sind huvitab ainult elujõuline bakterid või bakterid, mis võivad paljuneda. Niisiis, kuidas saate teada, kui palju baktereid teil on?

Samamoodi, et saate küsitleda 1000 inimest ja rakendada seda 10 000 inimesele, et välja mõelda, kuidas nad võiksid teatud teemal mõelda. Võite proovida võtta väikese osa oma esialgsest proovist, selgitada välja, kui palju baktereid seal on selle osa ja arvutage siis, et ligikaudselt teada saada, kui palju neid võis originaalis olla proov.

Antud proovi CFU leidmise protseduur hõlmab kõigepealt selle proovi lahjendamist. Seejärel kanti lahjendused õige kasvukeskkonnaga plaatidele. Mitmed lahjendused on sageli hea mõte, kuna algne proov võib olla väga kontsentreeritud.

Pärast seda, kui olete bakteritel teatud aja jooksul plaatidel kasvada lasknud, üksikud kolooniad loetakse taldrikule. Kui proov oli liiga kontsentreeritud, näete üksikute kolooniate asemel suurt bakterite kasvuga kaetud ala, mida nimetatakse a muru. See tähendab, et peaksite proovi veelgi lahjendama ja proovima uuesti kasvatada, et näeksite üksikuid kolooniaid.

Kuna üksikud kolooniad pärinevad ühest bakterist, kes paljundas ennast mitu korda, arvestatakse CFU-sse ainult neid.

Näide lahjenduste kasutamisest CFU arvutamiseks võiks toimida järgmiselt: Esiteks võtate õpetaja teile antud esialgsest proovist 1 ml ja plaadige see. Järgmisel päeval näete, et seal on bakterite muru. See tähendab, et CFU-d ei saa kokku lugeda. Järgmine samm on mõned lahjendused.

Kõigepealt võtate 1 ml proovi ja lahjendage see 9 ml vedelasse keskkonda. Kuna lahjendus on üks osa proovi üheksaks osaks lahjendit, nimetatakse seda lahjenduseks 1:10. Seejärel võtke 1 ml lahjendust 1:10 ja lisage see 9 ml vedelale keskkonnale. See lahjendus on 1: 100 lahjendus. Lõpuks teete lahjenduse 1: 1 000, võttes 1 ml lahjendusest 1: 100 ja lisades 9 ml vedelat keskkonda. Iga lahjenduse jaoks on teil nüüd 10 ml lahjendatud bakterikultuuri.

Lahjendused on tehtud, plaadite 0,5 ml lahjendusi. Märgistage kindlasti plaadid, millega lahjendati.

Järgmisel päeval tulete tagasi ja näete, et kõigil plaatidel on mõned üksikud kolooniad. Sa tahad valida taldriku vahele 30 ja 300 kolooniat. Näete, et 1: 1 000 lahjendusplaadil on umbes 10 kolooniat, see tähendab, et olete proovi üle lahjendanud. Sellest plaadist pole CFU leidmisel abi.

Lahjendusplaadil 1:10 on palju kolooniaid, võib-olla üle 300. Sel juhul võite minna 1: 100 plaadile. Loendate sellel plaadil olevad kolooniad ja leiate, et sellel on 179 kolooniat. See tähendab, et 0,5 ml 1: 100 lahjendusest sisaldab 179 CFU. Aga kuidas on lood esialgse prooviga?

Nüüd, kui teil on mõned andmed, saate CFU arvutamise teha algses proovis.

1. Võtke plaaditud kogus (0,5 ml) ja korrutage lahjendusteguriga (0,01), saades 0,005. Seda peate tegema, et leida lahjendustegur, mis andis CFU loenduse. Siin võimaldas pool milliliitrit lahjendusest 1: 100 lugeda CFU-d.

2. Jagage CFU lahjendusest (179) etapi 1 tulemusega (0,005), saades 35 800 CFU.

See tähendab, et algne 1 ml lahjendatud proov sisaldab 35 800 CFU. Teine võimalus seda öelda on öelda, et algses proovis on 35 800 CFU / ml.

CFU on suurepärane vahend, et leida, kui palju antud proovis on baktereid, seeni või mis tahes mikroorganisme. Siin kirjeldatud plaadistamismeetodist on eriti kasu väga kontsentreeritud proovide või organismide puhul, mis vedelkultuuris hästi ei kasva.