Wissenschaftler verwenden die Durchflusszytometrie, um zwischen verschiedenen Arten von Zellen oder mikroskopischen Organismen zu unterscheiden. Es ist ein Werkzeug, das in vielen Anwendungen wie der medizinischen Diagnostik oder der forensischen Pathologie verwendet wird. Während diese experimentelle Technik relativ einfach durchzuführen ist, ist die Analyse der erzeugten komplexen Daten durch das Durchflusszytometer ist aufgrund der vielen experimentellen Faktoren und/oder des Zytometers schwieriger Parameter. Daher ist es Routine, dass zytometrische Daten mit ausgereiften professionellen Programmen wie CELLQuest oder FlowJo visualisiert und analysiert werden. Vertrautheit mit Durchflusszytometrie-Techniken, Maschinen und Software ist notwendig, um die damit erzielten Ergebnisse zu verstehen Experimente.
Verdeutlichen Sie das Ziel des Experiments, indem Sie fragen: "Welche Frage oder Hypothese wurde untersucht?" Das wird sein erforderlich, um die Rohergebnisse an das geeignete Format und die entsprechenden Einstellungen für die weitere Analyse mit statistischer Zytometrie anzupassen Software. Nehmen Sie alle notwendigen Änderungen vor, damit die Daten mit den entsprechenden Einstellungen angezeigt werden (z. B. positive Zellen, negative Gates, Fluoreszenzintensität, Zellpopulationen usw.).
Tore finden. Zellen können gruppiert oder einfach zusammen in einem Dichteplot oder Konturdiagramm beobachtet werden. Die Gruppen trennen sich oft je nach ihrer Identität. Wenn eine Gruppe sehr intensiv nach einem bestimmten Marker oder Antikörper färbt, wird gefolgert, dass die Mitglieder dieser Gruppe alle die Identität des spezifischen Zelltyps aufweisen, der diesen Marker exprimiert. Es ist üblich, Zellen zu finden, die für mehr als einen dieser Marker positiv sind, und diese Zellen sind normalerweise ein Zwischenprodukt und werden als "doppelt positiv" bezeichnet.
Schau dir Streudiagramme an. Die Verteilung der Zellengruppen in einem Streudiagramm ist ein Hinweis auf die Größe der Zellen. Zellen mit sehr großen oder hohen Streuungen sind typischerweise große Zellen; sie können jedoch groß sein, einfach weil sie einen hohen Anteil an Zytoplasma enthalten, oder sie können hoch sein, weil sie einen sehr großen Zellkern haben. Abhängig von der untersuchten Biologie wird dies natürlich zwischen den Experimenten stark variieren.
Schau dir Zahlen an. Passen Sie die Diagramme an, um verschiedene Parameter auf einer Achse (normalerweise der X-Achse) anzuzeigen, während Sie die Zählungen auf der Y-Achse beibehalten. Dies gibt den Anteil der Stichprobenpopulation an, der für diesen bestimmten Parameter positiv ist, als a Peak wird normalerweise in einer positiv gefärbten Probe beobachtet, die in der Negativkontrolle fehlt Stichprobe.
Sehen Sie sich Histogramme mit mehreren Parametern an. Durch Anpassen der X-Achse und der Y-Achse, um jeweils einen anderen Parameter darzustellen, der während des Experiments untersucht, ist es möglich, ein tieferes Verständnis der Eigenschaften zu erhalten der Probe. Durch Einstellen der X-Achse auf rote Fluoreszenz und der Y-Achse auf grüne Fluoreszenz können beispielsweise Quadranten-Gatter für die. berechnet werden Probe, um vier Regionen eines Quadranten zu zeigen, in denen Zellen vorhanden sind, und gefärbt für entweder rote oder grüne Fluoreszenz, beide Farben oder keine bei alle. Dadurch kann eine heterogene Probe in ihre Bestandteile zerlegt und eventuell überlappende Einheiten visualisiert und quantifiziert werden.
Verweise
- „Analyse von Durchflusszytometriedaten“; Susan Sharrow; 1991
- „Durchflusszytometrie: Instrumentierung und Datenanalyse“; Marvin Van Dila; 1985
- „Durchflusszytometrie-Protokolle“; Teresa und Robert Hawley; 2004
Über den Autor
Palmer Owyoung hat einen Master of Arts in International Business von der University of California in San Diego und a Bachelor of Arts in Soziologie von der University of California in Santa Barbara und ausgebildeter Molekular Biologe. Seit 2006 ist er freiberuflicher Autor. Neben dem Schreiben ist er ein Vollzeit-Forex-Händler und Internet-Vermarkter.
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