Die TA-Klonierung ist eine einfache und bequeme Methode zur Subklonierung von Produkten der Polymerase-Kettenreaktion (PCR). „TA“ ist die Abkürzung für „Thymin“ und „Adenin“. Diese Klonierungstechnik nutzt die Fähigkeit von Thymin, in Gegenwart von Ligasen an Adenin zu hybridisieren. Restriktionsenzyme werden im Gegensatz zur traditionellen Subklonierungsmethode nicht verwendet. Stattdessen werden PCR-Produkte mit Taq-Polymerasen-Enzymen amplifiziert.
Methode
Das TA-Klonierungsverfahren verwendet die terminale Transferaseaktivität eines bestimmten Desoxyribonukleinsäure-Überhangs an jedem Ende des PCR-Produkts.
Ein linearisierter Klonierungsvektor mit einzelnen, drei Prime-T (3'-T)-Überhängen, der als T-Vektor bezeichnet wird, wird verwendet, um dieses PCR-Produkt in einen Plasmidvektor zu klonieren. Das PCR-Produkt wird mit diesem Vektor in hohem Anteil gemischt.
Der Mischung wird DNA-Ligase (T4-Ligase) zugesetzt, die die Hybridisierung und Verbindung der beiden Produkte ermöglicht.
Vorteile und Nachteile
Die TA-Klonierung ist ein bequemes Verfahren zum Subklonieren von PCR-Produkten in den linearisierten Vektor, und es ist viel einfacher und schneller als herkömmliche Subklonierungsverfahren. Da dieses Verfahren keine Restriktionsenzyme verwendet, können Produkte ohne Restriktionsenzymstellen kloniert werden.
Ein Nachteil besteht darin, dass TA-Klonierungskits sehr teuer sind und ihre Verwendung daher begrenzt ist. Außerdem gibt es kein gerichtetes Klonen; Daher ist die Wahrscheinlichkeit des Klonens in eine entgegengesetzte Richtung größer.
TA Klonierungskits
Mehrere Hersteller verkaufen TA-Klonierungskits. Einige sind Invitrogen, QIAGEN und Premier Biosoft.