Ihr Lehrer gibt Ihnen eine Bakterienprobe und fragt Sie: Wie viele lebensfähige Mikroorganismen sind in dieser Probe? Was bedeutet das und wie findet man es heraus? Eine Methode besteht darin, die Anzahl der koloniebildende Einheiten(KBE).
Was sind KBE?
CFU bezieht sich auf die Anzahl einzelner Kolonien eines Mikroorganismus, der auf einer Medienplatte wächst. Dieser Wert wiederum stellt die Anzahl der Bakterien dar, die sich replizieren können, da sie Kolonien auf der Platte gebildet haben. Es gibt eine CFU-Formel, die eine Probenahme beinhaltet.
Wie finden Sie KBE?
Die Anzahl der Bakterien in einer flüssigen Probe zu zählen ist sehr schwierig. Es sind zu viele und sie sind zu klein. Darüber hinaus können einige von ihnen tot und andere lebend sein, und die Toten sollten nicht zur Gesamtsumme zählen. Sie interessieren sich nur für lebensfähig Bakterien oder Bakterien, die sich vermehren können. Wie können Sie also herausfinden, wie viele Bakterien Sie haben?
Auf die gleiche Weise können Sie eine Umfrage unter 1.000 Personen durchführen und sie auf 10.000 Personen anwenden, um herauszufinden, wie sie über ein bestimmtes Thema denken. Sie können versuchen, einen kleinen Teil Ihrer Originalprobe zu entnehmen, um herauszufinden, wie viele Bakterien sich darin befinden diesen Teil und berechnen Sie dann ungefähr, wie viele es im Original gewesen sein könnten Stichprobe.
Verwenden von Verdünnungen zum Auffinden von KBE
Das Verfahren zum Auffinden von CFU einer gegebenen Probe beinhaltet zunächst das Verdünnen dieser Probe. Die Verdünnungen werden dann auf Platten mit dem richtigen Wachstumsmedium ausplattiert. Mehrfachverdünnungen sind oft eine gute Idee, da die Originalprobe sehr konzentriert sein kann.
Nachdem die Bakterien für eine bestimmte Zeit auf den Platten gezüchtet wurden, einzelne Kolonien werden auf einem Teller gezählt. Wenn die Probe zu konzentriert war, sehen Sie anstelle einzelner Kolonien eine große Fläche, die mit Bakterienwachstum bedeckt ist, das als a. bezeichnet wird Rasen. Das bedeutet, dass Sie Ihre Probe weiter verdünnen und erneut versuchen sollten, zu wachsen, damit Sie einzelne Kolonien sehen können.
Da einzelne Kolonien aus einem einzigen Bakterium stammen, das sich mehrfach repliziert hat, zählen nur diese zur KBE.
Experimentelles Verfahren zum Auffinden von CFU
Ein Beispiel für die Verwendung von Verdünnungen für eine KBE-Berechnung könnte wie folgt aussehen: Zuerst nehmen Sie von der Anfangsprobe, die Ihnen Ihr Lehrer gibt, 1 ml und plattieren es. Am nächsten Tag sehen Sie, dass es einen Rasen von Bakterien gibt. Dies bedeutet, dass Sie die Anzahl der KBE nicht zählen können. Der nächste Schritt besteht darin, einige Verdünnungen vorzunehmen.
Zuerst nehmen Sie 1 ml Probe und verdünnen sie in 9 ml flüssigem Medium. Da die Verdünnung ein Teil Probe auf neun Teile Verdünnungsmittel ist, wird sie als 1:10-Verdünnung bezeichnet. Dann nehmen Sie 1 ml der 1:10-Verdünnung und fügen diese zu 9 ml flüssigem Medium hinzu. Diese Verdünnung ist eine 1:100-Verdünnung. Zuletzt machen Sie eine Verdünnung von 1:1.000, indem Sie 1 ml der 1:100-Verdünnung nehmen und 9 ml flüssiges Medium hinzufügen. Für jede Verdünnung haben Sie jetzt 10 ml verdünnte Bakterienkultur.
Verdünnungen getan, Sie plattieren 0,5 ml der Verdünnungen auf Platten. Achten Sie darauf, die Platten zu beschriften, mit denen die Verdünnung ausplattiert wurde.
Am nächsten Tag kommen Sie zurück und sehen, dass auf allen Platten einzelne Kolonien vorhanden sind. Du möchtest einen Teller dazwischen pflücken 30 und 300 Kolonien. Sie sehen, dass die Verdünnungsplatte 1:1.000 etwa 10 Kolonien enthält, was bedeutet, dass Sie die Probe überverdünnt haben. Diese Platte wird beim Auffinden von CFU nicht hilfreich sein.
Die 1:10 Verdünnungsplatte hat viele Kolonien, vielleicht mehr als 300. In diesem Fall können Sie auf die 1:100-Platte gehen. Sie zählen die Kolonien auf dieser Platte und stellen fest, dass sie 179 Kolonien hat. Das bedeutet, dass 0,5 ml der 1:100-Verdünnung 179 KBE enthalten. Aber was ist mit der Originalprobe?
Was ist die KBE-Berechnung?
Nachdem Sie nun einige Daten haben, können Sie die CFU-Berechnung in der Originalprobe durchführen.
1. Nehmen Sie die plattierte Menge (0,5 ml) und multiplizieren Sie sie mit dem Verdünnungsfaktor (0,01), um 0,005 zu erhalten. Sie müssen dies tun, um den Verdünnungsfaktor zu finden, der Ihre KBE-Zahl ergab. Hier konnten Sie mit einem halben Milliliter der 1:100-Verdünnung KBE zählen.
2. Teilen Sie die KBE aus der Verdünnung (179) durch das Ergebnis aus Schritt 1 (0,005), um 35.800 KBE zu erhalten.
Das bedeutet, dass die verdünnte Originalprobe von 1 ml 35.800 KBE enthält. Anders ausgedrückt: Die Originalprobe hat 35.800 KBE/ml.
CFU ist ein großartiges Werkzeug, um herauszufinden, wie viele Bakterien, Pilze oder Mikroorganismen in einer bestimmten Probe enthalten sind. Die hier beschriebene Plattierungsmethode ist besonders hilfreich bei sehr konzentrierten Proben oder Organismen, die in Flüssigkultur nicht gut wachsen.
