Bakterien werden in Petrischalen auf einem als Bakterienagar bekannten festen Medium gezüchtet, auf dem sich erhabene, kreisförmige Kolonien bilden. Im Gegensatz zu einer einzelnen Bakterienzelle ist eine Kolonie eine Gruppe von Bakterien, die groß genug ist, um mit bloßem Auge sichtbar zu sein. Das Bakterienwachstum kann durch einfache Beobachtung der vorhandenen Kolonien gemessen werden; quantitativere Verfahren umfassen jedoch die Verwendung einer Zählkammer oder häufiger lebensfähige Plattenzählungen. Letzteres wird am häufigsten verwendet, da es auch qualitative Informationen wie den Einfluss unterschiedlicher Wachstumsbedingungen liefert. Da sich in einer Petrischale Milliarden von Bakterien befinden können, muss bei der Messung zunächst die Probe verdünnt werden, damit die Anzahl der Kolonien gezählt werden kann.
Gib in einem Reagenzglas 10 Mikroliter der Ausgangsbakterienkultur zu 90 Mikroliter Verdünnungsmedium. Den Deckel des Röhrchens fest schließen und vorsichtig vortexen, um eine homogene Mischung zu erhalten. Jetzt hat die Probe ein Zehntel ihrer ursprünglichen Konzentration.
Überführen Sie 10 Mikroliter dieser neuen Probe in ein neues Reagenzglas mit 90 Mikroliter Verdünnungsmedium und mischen Sie es erneut. Das Ergebnis ist wiederum eine weiter verdünnte Probe – jetzt beträgt sie ein Hundertstel ihrer ursprünglichen Konzentration. Wiederholen Sie dies mehrmals, bis die Originalprobe zwischen 10. verdünnt ist4 und 1010 mal. Stellen Sie sicher, dass jedes Röhrchen mit der richtigen Verdünnung beschriftet ist, z. B. 10-1, 10-2 und so weiter.
Geben Sie 10 Mikroliter der letzten Verdünnung auf die Agarplatte. Verteilen Sie die Bakterienlösung mit der Spreizkante über die gesamte Oberfläche der Agarplatte. Wiederholen Sie dies für zwei weitere Teller. Es ist auch üblich, diese Schritte zum Vergleich mit anderen Verdünnungsstufen durchzuführen. Achten Sie darauf, die Unterseiten der Platten zu beschriften. Bringen Sie die Deckel jeder Platte wieder an und lassen Sie die Agarplatten einige Minuten lang entweder auf einem Labortisch unter einer Flamme oder in einem Inkubator trocknen. Legen Sie die Platten in den Inkubator, der auf die geeignete Temperatur für den Bakterienstamm eingestellt sein sollte. 12 bis 16 Stunden wachsen lassen.
Kolonien sollten nach 16 Stunden sichtbar sein; einige genetische Veränderungen können jedoch länger dauern (z. B. Farbentwicklung). Wenn Kolonien zu sehen sind, nehmen Sie die Platten heraus und suchen Sie nach Platten mit 30 bis 300 Kolonien. Setzen Sie mit einem Permanentmarker einen Punkt auf den Boden der Petrischale – die Seite mit dem Agar, nicht den Deckel – wo immer eine Kolonie durch den Agar hindurch sichtbar ist. Zählen Sie jeden Markierungspunkt. Wiederholen Sie dies für jedes Gericht.
Um die Bakterienmenge in der Ausgangskultur für dieses Experiment zu messen, muss die Verdünnung in den Berechnungen an zwei Stellen umgekehrt werden. Erstens, wenn Sie einen Mikroliter aus dem Reagenzglas genommen haben, um ihn in die Petrischale zu geben, haben Sie ein Zehntel der verdünnten Probe genommen, also müssen Sie alles mit 10 multiplizieren, um dies umzukehren. Wenn der Verdünnungsfaktor im Reagenzglas beispielsweise 10-7, dann muss die Anzahl der Kolonien mit 10. multipliziert werden7 um den Verdünnungseffekt umzukehren. Entfernen Sie einfach das negative Vorzeichen vom Exponenten in den Berechnungen. Verwenden Sie die Formel:
[Anzahl der gezählten Kolonien] × 10 × [wie oft die Probe multipliziert werden muss, um die ursprüngliche Konzentration zu erreichen: zum Beispiel 105] = Anzahl der koloniebildenden Einheiten (KBE) pro Milliliter der Ausgangskultur. Dies ist das Bakterienwachstum in Ihren Petrischalen.
