Die meisten wissenschaftlichen Glaswaren erfordern eine regelmäßige Neukalibrierung oder zumindest eine Überprüfung ihrer vorherigen Kalibrierung. Die Methode zum Kalibrieren von Messzylindern hängt vom Zylindertyp ab. Messzylinder sind entweder mit TC, was „enthalten“ bedeutet, oder TD, was „liefern“ bedeutet, gekennzeichnet. Für einen TC Zylinder, die seitlich markierten Volumenanzeigen geben die Flüssigkeitsmenge an, die in der Zylinder. Diese Menge weicht vom tatsächlich vom Zylinder gelieferten Volumen ab, wenn die Flüssigkeit in einen anderen Behälter umgefüllt wird. Üblicherweise verbleiben einige Tropfen Flüssigkeit im Zylinder, und dieses Flüssigkeitsvolumen wurde bei einem auf TD kalibrierten Zylinder berücksichtigt.
Die Kalibriermethode basiert auf der Messung des Wasservolumens und der anschließenden Bestimmung der Masse des gemessenen Wassers. Wasser weist bei Raumtemperatur eine Dichte von 1,00 Gramm pro Milliliter (g/ml) auf. Dies bedeutet, dass je 1,00 ml Wasser 1,00 g wiegen sollten. Somit sollte ein Zylinder mit 5,0 ml Wasser 5,0 g Wasser enthalten.