Sådan beregnes cellekoncentration

Forskere og teknikere har ofte brug for at beregne koncentrationen af ​​celler i en suspension. For eksempel, når en patient får sit blod trukket ud på en lægekontor, kan laboratoriet bruge bestemte metoder til at lede efter mængden af ​​hvide blodlegemer i en given mængde blod. Dette giver lægen en masse information om patientens helbred, især hans immunsystem, og om han kæmper for en infektion eller en anden sygdom. Test som denne kan se efter mange andre celler i blod såvel som rygmarvsvæske og andre kropsvæsker, såsom sædcelleantal i sæd til fertilitetsformål. Forskere beregner også cellekoncentrationer af bakterier, gær og andre mikroorganismer til mange formål lige fra økologisk forskning til industriel teknologi. En af de mest almindelige teknikker undervises også i mange universitetsbiologikurser, og den bruger en enhed kaldet et tællekammer.

Før cellesuspensionen kan gå ind i tællekammeret, kan det være nødvendigt at fortynde det, fordi det kan indeholde tusinder eller millioner af celler. I så fald kan cellerne ikke med rimelighed tælles. For at fortynde prøven skal du bruge en steril pipette til at placere ti mikroliter af celleopløsningen i et reagensglas indeholdende 90 mikroliter af et fortyndingsmiddel. Typen af ​​fortyndingsmiddel afhænger af typen af ​​celle. Bland det godt. Denne opløsning er nu ti gange mere fortyndet end den oprindelige prøve, så dens fortyndingsfaktor er 10

-1. Mærk det. Gentag dette flere gange ved hjælp af en steril pipette hver gang, indtil opløsningen er fortyndet nok. Hvis du fortyndede det en anden gang, var det andet reagensglas 100 gange mere fortyndet end den oprindelige opløsning, så fortyndingsfaktoren var 10-2 og så videre.

Det kan være nødvendigt at prøve flere fortyndinger for at bestemme den rigtige fortyndingsfaktor for tællekammeret. Et tællekammer er grundlæggende en meget lille, klar, rektangulær kasse med en præcis dybde og et præcist gitter indskrevet over toppen. Det er også kendt som et hæmocytometer eller undertiden et hæmacytometer. Målet er, at suspensionen skal fortyndes nok til, at når den ses i tællekammeret, overlapper ingen celler, og de fordeles gennem gitteret på en ensartet måde. Pipetter den fortyndede suspension indeholdende cellerne i brønden i tællekammeret, hvor den vil slå sig ned i gitterkammeret gennem kapillær handling. Placer tællekammeret på mikroskop-scenen og se det under lav effekt.

Gitteret indeholder firkanter, der er lavet af endnu mindre firkanter. Vælg cirka fire eller fem firkanter, eller hvor mange du har brug for at tælle mindst 100 celler i et mønster, du vælger, såsom de fire hjørner og en midterkant. Hvis cellerne er store, kan det være de store firkanter, men hvis cellerne er små, kan du i stedet vælge de mindre firkanter.

Det specifikke volumen af ​​hver gitterkvadrat kan variere efter tællekammerproducent, men ofte er kammerets dybde 0,1 millimeter, arealet af de store firkanter er 1 kvadrat millimeter, og arealet af de mindre firkanter er 0,04 kvadrat millimeter. De større firkanter har derefter et volumen på 0,1 kubikmeter. Antag i dette eksempel, at du har talt i alt 103 celler i fem firkanter, og at du fortyndede den indledende prøve, indtil fortyndingsfaktoren var 10-2.

Hvis hvert gitterkvadrat har et volumen på 0,1 kubikmillimeter og fem blev talt, var det samlede volumen af ​​det kammer, der blev talt, 0,5 kubikmillimeter, og der var 103 celler. Dobbelt for at gøre det 1 kubikmillimeter ville gøre det til 206 celler. En kubikcentimeter svarer til 1 milliliter, hvilket er en nyttig måling for væsker. Der er 1.000 kubikmillimeter i en kubikcentimeter. Derfor, hvis der havde været en kubikcentimeter eller en milliliter suspension, ville du have talt 206.000 (206 x 1.000) celler. Sådan ser det ud som en ligning:

Volumen af ​​gitterkvadrat × antal kvadrater optalt = samlet volumen af ​​talt suspension

Antal celler ÷ volumen talt suspension = celletal pr. Millimeter kuberet

Celletal pr. Millimeter kuberet × 1000 = celletal pr. Milliliter

Du bliver nødt til at tage højde for enhver fortynding, der udføres for at gøre den oprindelige opløsning tællelig under mikroskopet. I dette eksempel er fortyndingsfaktoren 10-2. Sådan beregnes den oprindelige koncentration af opløsningen:

Celleantal pr. Milliliter ÷ fortyndingsfaktor = Cellekoncentration

I dette eksempel er celletællingen pr. Milliliter 206.000 og dividerer den med 10-2 (0,01) giver en cellekoncentration på 20.600.000 celler pr. Milliliter i den indledende prøve.

  • Del
instagram viewer