Flydende næringsvæske bruges til at dyrke bakterier såsom Escherichia coli. Opskrifter til denne bouillon varierer afhængigt af bakteriearten og tilstedeværelsen af genetiske modifikationer, fx antibiotikaresistens. Bouillon kan størknes ved tilsætning af agar, som gør det muligt for bakterierne at danne forskellige kolonier, hvorimod de i flydende kultur simpelthen dispergerer i hele volumenet. Dette er en grundlæggende, men essentiel teknik til avancerede metoder såsom genkloning eller mikrobiologiske assays. Denne artikel antager, at standard laboratorium Escherichia coli stammer skal dyrkes på Luria bouillon (LB) agarplader (eller petriskåle).
Vej 10 gram trypton af bakteriekvalitet, 5 gram gærekstrakt, 5 gram natriumchlorid, 15 gram agar eller agarose og 1 ml 1N natriumhydroxid. Bland disse med et volumen destilleret og autoklaveret sterilt vand, indtil der opnås 1 liter medium. Autoklaver mediet i løst lukkede flasker eller kolber i 25 minutter. Lad afkøle til ca. 50 grader Celsius, inden du tilsætter reagenser, der vil blive ødelagt ved høj varme, såsom antibiotika eller andre kosttilskud.
Lad de autoklaverede medier afkøle til 50 grader Celsius og ikke lavere end 45 grader Celsius, da agaren vil sætte sig i sin beholder, før den kan hældes. Få sterile petriskåle, og hæld nok til at dække hele overfladearealet af pladen og mindst halvdelen af dens dybde. Undgå overfyldning af pladerne, og lad ikke agaren komme i kontakt med skålens øverste kant. Tillad pladerne at størkne i et sterilt miljø (f.eks. Under en laminær strømningshætte) ved at lade lågene af og til et hjørne af hætten.
Tør pladerne. Selvom pladerne kan bruges, så snart de er hærdet, vil der være noget fugt på agarens overflade, hvilket forhindrer bakteriekolonier i at klæbe tilstrækkeligt. Derfor er det bedst at tørre pladerne, før der påføres bakterier, for eksempel ved at lade dem sidde ved stuetemperatur i et par dage eller i en halv time under en laminar flowhætte eller i en 37 grad Celsius inkubator.
Opbevar pladerne. Tørrede plader skal stables med hovedet (omvendt) på deres låg og returneres til deres originale emballage, tapet lukket og enten pakket i folie for at beskytte mod lys eller i en passende beholder. Skriv altid klargøringsdatoen på pladerne, og undgå at bruge dem, hvis pladerne er mere end 2 måneder gamle.
Referencer
- "Aktuelle protokoller i molekylærbiologi"; Karen Elbing og Roger Brent; 2002
Tips
- Udfør så mange af ovenstående trin (helst alle) som muligt inden for et sterilt miljø (f.eks. Under en åben flamme eller en laminær strømningshætte) for at forhindre luftbårne bakterielle forurenende stoffer i at komme ind og vokse i medier.
Om forfatteren
Palmer Owyoung har en Master of Arts i international forretning fra University of California i San Diego og en Bachelor of Arts i sociologi fra University of California i Santa Barbara og er uddannet molekylær biolog. Han har været freelance skribent siden 2006. Ud over at skrive er han en fuldtids forexhandler og internetmarkedsfører.
Fotokreditter
Jupiterimages / Comstock / Getty Images