Din lærer giver dig en prøve af bakterier og spørger dig: Hvor mange levedygtige mikroorganismer er der i denne prøve? Hvad betyder dette, og hvordan finder du ud af det? En metode er ved at finde antallet af kolonidannende enheder(CFU).
Hvad er CFU?
CFU henviser til antallet af individuelle kolonier af enhver mikroorganisme, der vokser på en medieplade. Denne værdi repræsenterer igen antallet af bakterier, der er i stand til at replikere, da de har dannet kolonier på pladen. Der er en CFU-formel, der involverer prøveudtagning.
Hvordan finder du CFU?
Det er meget vanskeligt at tælle antallet af bakterier i en flydende prøve. Der er for mange af dem, og de er for små. Desuden kan nogle af dem være døde og andre i live, og de døde bør ikke tælle med i summen. Du er kun interesseret i levedygtig bakterier eller bakterier, der kan replikere. Så hvordan kan du finde ud af, hvor mange bakterier du har?
På samme måde som du kan tage en afstemning på 1.000 mennesker og anvende den på 10.000 mennesker for at finde ud af, hvordan de måske tænker på et bestemt emne. Du kan prøve at tage en lille del af din originale prøve og finde ud af, hvor mange bakterier der er i den del, og bereg derefter for at beregne, hvor mange der muligvis har været i originalen prøve.
Brug af fortyndinger til at finde CFU
Fremgangsmåden til at finde CFU for en given prøve indebærer først at fortynde prøven. Fortyndingerne udplades derefter på plader med det korrekte vækstmedium. Flere fortyndinger er ofte en god idé, da den originale prøve kan være meget koncentreret.
Efter at have tilladt bakterierne at vokse på pladerne i en given tid, individuelle kolonier tælles på en plade. Hvis prøven var for koncentreret, vil du i stedet for individuelle kolonier se et stort område dækket af bakterievækst, der kaldes a græsplæne. Dette betyder, at du skal fortynde din prøve yderligere og prøve at vokse igen, så du kan se individuelle kolonier.
Da individuelle kolonier kommer fra en enkelt bakterie, der replikerede sig selv mange gange, tæller kun disse med i CFU.
Eksperimentel procedure til at finde CFU
Et eksempel på brug af fortyndinger til at foretage en CFU-beregning kan gå som følger: Først fra den indledende prøve, som din lærer giver dig, tager du 1 ml og plader den. Den næste dag ser du, at der er en græsplæne af bakterier. Dette betyder, at du ikke kan tælle antallet af CFU. Det næste trin er at foretage nogle fortyndinger.
Først tager du 1 ml prøve og fortynder den til 9 ml flydende medier. Da fortyndingen er en delprøve til ni dele fortyndingsmiddel, betegnes den som en 1:10 fortynding. Derefter tager du 1 ml af 1:10 fortyndingen og tilføjer det til 9 ml flydende medier. Denne fortynding er en 1: 100 fortynding. Endelig foretager du en 1: 1.000 fortynding ved at tage 1 ml af 1: 100 fortyndingen og tilsætte 9 ml flydende medier. For hver fortynding har du nu 10 ml fortyndet bakteriekultur.
Fortyndede fortyndinger, du plader 0,5 ml af fortyndingerne på pladerne. Sørg for at mærke pladerne, hvor fortyndingen blev belagt.
Den næste dag kommer du tilbage og ser, at alle pladerne har nogle individuelle kolonier. Du vil vælge en tallerken imellem 30 og 300 kolonier. Du ser, at fortyndingspladen 1: 1.000 har ca. 10 kolonier, så det betyder, at du har fortyndet prøven for meget. Denne plade vil ikke være til hjælp ved at finde CFU.
Fortyndingspladen 1:10 har mange kolonier, måske mere end 300. I så fald kan du gå på pladen 1: 100. Du tæller kolonierne på denne plade og finder ud af, at den har 179 kolonier. Dette betyder, at 0,5 ml af 1: 100-fortyndingen indeholder 179 CFU. Men hvad med den oprindelige prøve?
Hvad er CFU-beregning?
Nu hvor du har nogle data, kan du foretage CFU-beregningen i den originale prøve.
1. Tag det beløb, du belagte (0,5 ml), og gang med fortyndingsfaktoren (0,01) for at give 0,005. Du skal gøre dette for at finde den fortyndingsfaktor, der gav dit CFU-tal. Her tillod en halv milliliter af fortyndingen 1: 100 dig at tælle CFU.
2. Opdel CFU'en fra fortyndingen (179) med resultatet fra trin 1 (0,005) for at give 35.800 CFU.
Dette betyder, at den originale 1 ml prøve, der blev fortyndet, indeholder 35.800 CFU. En anden måde at udtrykke dette på er at sige, at den originale prøve har 35.800 CFU / ml.
CFU er et fantastisk værktøj til at finde ud af, hvor mange bakterier, svampe eller andre mikroorganismer der er i en given prøve. Udpladningsmetoden beskrevet her er især nyttig til meget koncentrerede prøver eller organismer, der ikke vokser godt i flydende kultur.