Højtydende væskekromatografi (HPLC) er en laboratorieteknik, der bruges til at adskille og identificere forbindelser. Det er en type søjlekromatografi, der er afhængig af forskellige polariteter af forbindelser i en opløsning for at adskille dem. HPLC adskiller sig fra standard søjlekromatografi, fordi det bruger tryk til at tvinge løsningen hurtigere gennem søjlen og derfor producerer hurtigere og undertiden mere nøjagtige resultater. Målet er at adskille forbindelser i kolonnen og få dem til at gå ud separat.
På grund af HPLC's hastighed og afhængighed af forskellige polariteter af forbindelser, to forbindelser med lignende struktur og polariteter kan forlade kromatografiapparatet på samme tid eller næsten det samme tid. Dette er kendt som koelution. Coelution gør det vanskeligt at bestemme, hvilken del af blandingen der elueres på hvilket tidspunkt.
HPLC bruger typisk en glaskolonne fyldt med perler lavet af forskellige materialer. Blandingerne, der tvinges gennem søjlen, har kemikalier, der binder med forskellige styrker til perlerne. Styrken af bindingen, der afhænger af ligheden i polaritet, bestemmer, hvor længe kemikaliet vil binde sig til perlen, før det frigives. Nogle forbindelser binder så stærkt, at de i det væsentlige aldrig frigøres fra perlerne i søjlen og måles aldrig i den opløsning, der kommer ud af søjlen.
Typiske laboratorieseparationsteknikker involverer udvikling af et assay eller en separationsmetode og derefter implementering af dette assay for at adskille individuelle forbindelser fra en opløsning. Dette resulterer dog normalt i flere løsninger, der også skal gennemgås procedurer, hvilket fører til en eksponentiel stigning i kompleksitet. Selvom HPLC ofte kan forenkle og fremskynde denne proces, kan omkostningerne ved at udvikle et HPLC-apparat blive enorme. Selvom det er meget mere effektivt, er det meget dyrere at udvikle et HPLC-apparat end at udvikle andre assays til adskillelse af forbindelser. Dette gør det ikke økonomisk levedygtigt for mange små privatejede laboratorier.
HPLC bruges ikke kun til at adskille enkle forbindelser, det bruges også til at isolere specifikke proteiner ud af en cellulær blanding. I dette tilfælde er perlerne i søjlen normalt overtrukket med et antistof, der er specifikt for det protein, du skal samle. Proteinerne binder antistofferne, og den resterende opløsning føres gennem søjlen, hvorefter proteinerne frigives ved hjælp af en anden opløsning og opsamles. Dette kræver, at en højt kvalificeret tekniker til enhver tid overvåger søjlen og sørger for, at processen kører nøjagtigt som planlagt.