Vědci a technici často potřebují vypočítat koncentraci buněk v suspenzi. Když si například pacient nechá odebrat krev v ordinaci lékaře, může laboratoř určitými metodami zjistit množství bílých krvinek v daném objemu krve. To dává lékaři spoustu informací o zdraví jejího pacienta, zejména o jeho imunitním systému a o tom, zda bojuje s infekcí nebo jinou nemocí. Takové testy mohou hledat mnoho dalších buněk v krvi, stejně jako míchu a další tělesné tekutiny, jako je počet spermií v spermatu pro účely plodnosti. Vědci také počítají buněčné koncentrace bakterií, kvasinek a dalších mikroorganismů pro četné účely od ekologického výzkumu po průmyslové technologie. Jedna z nejběžnějších technik se také vyučuje na mnoha hodinách biologie na vysoké škole a využívá zařízení zvané počítací komora.
Než může buněčná suspenze přejít do počítací komory, bude možná nutné ji zředit, protože může obsahovat tisíce nebo miliony buněk. V takovém případě nelze buňky rozumně spočítat. Ke zředění vzorku použijte sterilní pipetu a vložte deset mikrolitrů buněčného roztoku do zkumavky obsahující 90 mikrolitrů ředidla. Typ ředidla bude záviset na typu buňky. Dobře to promíchejte. Toto řešení je nyní desetkrát více ředěné než původní vzorek, takže jeho ředicí faktor je 10
Možná budete muset vyzkoušet několik ředění, abyste určili správný ředicí faktor pro počítací komoru. Počítací komora je v podstatě velmi malá, jasná, obdélníková krabička s přesnou hloubkou a přesnou mřížkou vepsanou přes vrchol. To je také známé jako hemocytometr, nebo někdy hemacytometr. Cílem je, aby suspenze byla natolik zředěná, že při pohledu do počítací komory se nepřekrývají žádné buňky a jsou rovnoměrně rozloženy po mřížce. Pipetujte zředěnou suspenzi obsahující buňky do jamky v počítací komoře, kde se kapilárním působením usadí v komoře mřížky. Umístěte počítací komoru na stolní mikroskop a sledujte ji při nízkém výkonu.
Mřížka obsahuje čtverce, které jsou vyrobeny z ještě menších čtverců. Vyberte přibližně čtyři nebo pět čtverců, nebo jakkoli potřebujete počítat alespoň 100 buněk, ve vzoru podle vašeho výběru, například čtyři rohy a středový čtverec. Pokud jsou buňky velké, mohou to být velké čtverce, ale pokud jsou buňky malé, můžete místo toho zvolit menší čtverce.
Specifický objem každého čtverce mřížky se může lišit podle výrobce počítající komory, ale hloubka komory je často 0,1 milimetry, plocha velkých čtverců je 1 čtvereční milimetr a plocha menších čtverců je 0,04 čtverečních milimetry. Větší čtverce tedy mají objem 0,1 milimetrů krychlových. V tomto příkladu předpokládejme, že jste napočítali celkem 103 buněk na pět čtverců a že jste ředili počáteční vzorek, dokud faktor ředění nebyl 10-2.
Pokud má každý čtverec mřížky objem 0,1 kubických milimetrů a bylo spočítáno pět, pak byl celkový objem počítané komory 0,5 kubického milimetru a bylo zde 103 buněk. Zdvojnásobeno na 1 kubický milimetr by z toho bylo 206 buněk. Jeden centimetr krychlový odpovídá 1 mililitru, což je užitečné měření pro kapaliny. V kubickém centimetru je 1 000 kubických milimetrů. Pokud by tedy byl suspenze kubický centimetr nebo mililitr, napočítali byste 206 000 (206 x 1 000) buněk. Takto to vypadá jako rovnice:
Objem čtverce mřížky × počet spočítaných čtverců = celkový objem počítané suspenze
Počet buněk ÷ objem počítané suspenze = počet buněk na milimetry krychlové
Počet buněk na milimetr krychlový × 1000 = počet buněk na mililiter
Budete muset počítat s jakýmkoli provedeným ředěním, aby bylo počáteční řešení počitatelné pod mikroskopem. V tomto příkladu je faktor ředění 10-2. Výpočet počáteční koncentrace roztoku:
Počet buněk na mililiter ÷ zřeďovací faktor = koncentrace buněk
V tomto příkladu je počet buněk na mililiter 206 000 a vydělí se tím 10-2 (0,01) poskytuje koncentraci buněk 20 600 000 buněk na mililiter v počátečním vzorku.