Hlavním důvodem, proč obarvíte vzorek před jeho vložením pod mikroskop, je lepší pohled na něj, ale obarvení dělá mnohem víc, než jen zvýraznění obrysů buněk. Některé skvrny mohou proniknout buněčnými stěnami a zvýraznit buněčné komponenty, což vědcům pomůže vizualizovat metabolické procesy. Skvrny také pomáhají rozlišovat mezi živými buňkami a mrtvými. Barvení navíc umožňuje vědcům spočítat počet buněk konkrétního typu v určité biomase. Existuje dvacet nebo více různých druhů skvrn a každá má svůj účel.
TL; DR (příliš dlouhý; Nečetl)
Hlavním účelem barvení je zvýraznění buněk a jejich částí. Existuje více než 20 různých typů skvrn a typ použité skvrny závisí na tom, co hledáte.
Druhy skvrn
Výběr mořidla závisí na tom, co hledáte. Ne všechny skvrny jsou vhodné pro živé buňky, ale mezi ty, které patří, patří Bismarckova hnědá, toluenová červená, nilská modrá a nilská červená a některé fluorescenční látky používané ke zvýraznění DNA. Některé skvrny zvýrazňují spory, jiné detekují lipidy a proteiny a jiné mění barvu v přítomnosti škrobů. Účel vyšetření určuje nejlepší typ skvrny, který se má použít. Například lékař provádějící nátěr PAP by použil Eosin Y. Je to kyselé fluorescenční barvivo, které zčervená, když kontaktuje červené krvinky, cytoplazmu a buněčné membrány. Používá se také k testování krevní dřeně.
V některých případech může vyšetřovatel použít více než jednu skvrnu. Například hematoxylin je skvrna, která mění buněčná jádra na modrou. Při použití ve spojení s eosinem, který mění ostatní části buňky na červenou nebo růžovou, poskytuje silnější kontrast a usnadňuje rozlišení jader. Pokud jsou tyto dvě skvrny použity společně, je snazší vyšetřit PAP nátěry a vzorky krevní dřeně.
Gramova skvrna: Pracovníci nemocnice používají Gramovu skvrnu k identifikaci škodlivých bakterií. Jedná se vlastně o řadu barviv, která mají různé účinky na různé druhy bakterií a poskytují lékařům důležitý diagnostický nástroj. Gramova skvrna je třídílný proces. Do první se přidá Huckerova křišťálově fialová, která obarví všechny bakterie jednotnou fialovou barvou. V další fázi se přidá jodové barvivo, které způsobí přilnutí barvy k grampozitivním buňkám, kterými jsou především Staphylococcus a Streptococcus. Skvrna je odplavena, takže grampozitivní buňky mají zřetelnou fialovou barvu; potom se zavede třetí barvivo, safranin O, aby se zvýšil kontrast mezi gramnegativními bakteriemi a zbytkem materiálu ve sklíčku.
Postup barvení
Při přípravě vzorku na podložním sklíčku jej můžete připevnit na sucho nebo na mokro, můžete ho rozřezat na tenkou část nebo rozmazat. Při použití skvrn je obvyklým postupem namočení vzorku, což znamená umístit kapku vody na podložní sklíčko, vložit vzorek do vody a přikrýt krycím sklíčkem. Potom pomocí kapátka nanesete skvrnu na roh sklíčka a necháte ji kapilárně přitáhnout ke vzorku. Pomáhá dát papírovou utěrku na opačnou stranu sklíčka, aby přilákala vodu. Jakmile se skvrna rozšíří po celém sklíčku, je vzorek připraven k vyšetření.