Izolační techniky pro pruhovou desku

I když je nelze vidět pouhým okem, bakterie jsou všude. Existují v potravinách, půdě, vodě, povrchech v našich domovech a v našich tělech. Bakterie obecně existují ve smíšených populacích. Izolace konkrétní bakterie z jiných bakteriálních druhů v daném vzorku umožňuje mikrobiologům studovat její strukturu a funkci, vlastnosti použité při její identifikaci. Mikrobiologové často izolují bakterie pomocí jedné z několika technik pruhových desek.

Nástroje

K přenosu mikroorganismů se používá očkovací smyčka. Skládá se z nichromového nebo platinového drátu s malou kruhovou smyčkou na jednom konci. Druhý konec je rovný a zasouvá se do rukojeti. K dispozici jsou také plastové jednorázové očkovací smyčky. Bakterie lze izolovat, pouze pokud rostou. Mikrobiologové pěstují bakterie pro izolaci pruhů na mělkých kulatých Petriho miskách naplněných pevným médiem zvaným agar. Agar napodobuje prostředí, ve kterém bakterie přirozeně rostou. Misky naplněné médiem jsou sterilní a zakryté, aby se zabránilo růstu nežádoucích organismů. Během izolace pruhové desky se očkovací smyčka opakovaně sterilizuje v plameni Bunsenova hořáku.

Zásada

Technika pruhové desky je nejoblíbenější metodou pro izolaci specifických bakterií ze vzorku obsahujícího směs mikroorganismů. Tato technika v podstatě ředí počet organismů a snižuje jejich hustotu. Umožňuje mikrobiologům rozlišovat a izolovat jednotlivé bakteriální kolonie. Kolonie je viditelný shluk bakterií. Všechny bakterie v jedné kolonii pocházejí ze stejné bakteriální buňky. Jednotlivé kolonie jsou tedy „čisté“ kolonie. Čistá kolonie se přenese na jinou destičku za vzniku čisté kultury sestávající z jednoho typu bakterií.

Postup

Když je provedeno správně, izolace pruhové destičky zředí vzorek a umožní jednotlivým bakteriálním buňkám vyvinout se do izolovaných kolonií. Mikrobiolog začíná sterilizací očkovací smyčky v plameni. Ochlazuje smyčku tím, že se jí dotýká agaru, poté smyčku ponoří do vzorku a roztáhne ji tam a zpět, aby zakryla část talíře. Sterilizuje smyčku, ochladí ji a naočkuje druhou přilehlou část destičky tažením smyčku přes první část několikrát a pokrýt druhou část pomocí cikcaku pohyb. To zachytí malé množství bakterií z první sekce a přenese je do druhé sekce. Počet opakování tohoto základního postupu závisí na použité metodě pruhové desky. Přes tuto metodu se původní vzorek používá pouze k naočkování první části destičky.

Metoda pruhové desky

Metody pruhové destičky se liší podle počtu pruhů agaru. Metoda T-pruhu používá tři sekce: horní polovinu a dvě stejně velké spodní sekce. Počáteční inokulum je umístěno v horní polovině destičky. Bakterie jsou taženy z horní části do jedné ze spodních částí a poté z této spodní části do druhé. V kvadrantové metodě jsou pruhovány čtyři stejně velké úseky. Metoda kontinuálního pruhu obvykle zahrnuje naočkování horní poloviny destičky a její otočení o 180 stupňů, a naočkování druhé poloviny destičky bez sterilizace smyčky nebo tažení bakterií z předchozí sekce.

  • Podíl
instagram viewer