Klonování TA je jednoduchá a pohodlná metoda subklonování produktů polymerázové řetězové reakce (PCR). „TA“ je zkratka pro „thymin“ a „adenin“. Tato klonovací technika využívá schopnost tyminu hybridizovat s adeninem v přítomnosti ligáz. Na rozdíl od tradiční metody subklonování se restrikční enzymy nepoužívají. Místo toho jsou produkty PCR amplifikovány pomocí Taq polymerázových enzymů.
Metoda
Metoda klonování TA využívá aktivitu terminální transferázy určitého převisu určité deoxyribonukleové kyseliny na každý konec produktu PCR.
Pro klonování tohoto produktu PCR do plazmidového vektoru se použije linearizovaný klonovací vektor s jednoduchými třemi převisy prime-T (3'-T) nazývaný T-vektor. Produkt PCR je smíchán s tímto vektorem ve vysokém poměru.
Do směsi se přidá DNA ligáza (T4 ligáza), což umožňuje hybridizaci a spojení obou produktů.
Výhody a nevýhody
Klonování TA je pohodlná metoda subklonování produktů PCR v linearizovaném vektoru a je mnohem jednodušší a rychlejší než tradiční metody klonování. Protože tato metoda nepoužívá restrikční enzymy, lze klonovat produkty bez míst s restrikčními enzymy.
Nevýhodou je, že klonovací soupravy TA jsou velmi drahé, a proto je jejich použití omezené. Kromě toho neexistuje žádné směrové klonování; takže pravděpodobnost klonování v opačném směru je větší.
Klonovací sady TA
Několik výrobců prodává klonovací soupravy TA. Některé jsou Invitrogen, QIAGEN a Premier Biosoft.