Váš učitel vám předá vzorek bakterií a zeptá se vás: Kolik životaschopných mikroorganismů je v tomto vzorku? Co to znamená a jak na to přijdete? Jednou metodou je zjištění počtu jednotky tvořící kolonie(CFU).
Co jsou CFU?
CFU se týká počtu jednotlivých kolonií jakéhokoli mikroorganismu, které rostou na desce média. Tato hodnota zase představuje počet bakterií schopných replikace, protože vytvořily kolonie na destičce. Existuje vzorec CFU, který zahrnuje vzorkování.
Jak najdete CFU?
Počítání počtu bakterií v kapalném vzorku je velmi obtížné. Je jich příliš mnoho a jsou příliš malé. Někteří z nich mohou být navíc mrtví a jiní živí, a mrtví by se do celkového počtu započítávat neměli. Zajímá vás pouze životaschopný bakterie nebo bakterie, které se mohou replikovat. Jak tedy zjistit, kolik bakterií máte?
Stejným způsobem, jako můžete provést průzkum 1000 lidí, a použít jej na 10 000 lidí, abyste zjistili, jak by mohli přemýšlet o určitém tématu. Můžete zkusit odebrat malou část původního vzorku a zjistit, kolik bakterií je v něm tuto část a poté vypočítat, aby se zjistilo, kolik jich mohlo být v originále vzorek.
Použití ředění k vyhledání CFU
Postup vyhledání CFU daného vzorku zahrnuje první zředění tohoto vzorku. Ředění se poté nanesou na plotny se správným růstovým médiem. Vícenásobná ředění jsou často dobrý nápad, protože původní vzorek může být velmi koncentrovaný.
Poté, co necháte bakterie po určitou dobu růst na deskách, jednotlivé kolonie se počítají na talíři. Pokud byl vzorek příliš koncentrovaný, uvidíte místo jednotlivých kolonií velkou plochu pokrytou bakteriálním růstem, která se nazývá a trávník. To znamená, že byste měli svůj vzorek dále zředit a zkusit znovu růst, abyste viděli jednotlivé kolonie.
Jelikož jednotlivé kolonie pocházejí z jediné bakterie, která se mnohonásobně replikovala, do CFU se počítají pouze tyto.
Experimentální postup pro nalezení CFU
Příklad použití ředění k výpočtu CFU může vypadat následovně: Nejprve z počátečního vzorku, který vám dá váš učitel, vezmete 1 ml a nanesete ho. Následujícího dne uvidíte, že tam je trávník bakterií. To znamená, že nemůžete spočítat počet CFU. Dalším krokem je provedení některých ředění.
Nejprve vezmete 1 ml vzorku a zředíte jej do 9 ml kapalného média. Protože ředění je jeden díl vzorku na devět dílů ředidla, je označováno jako ředění 1:10. Poté si vezměte 1 ml ředění 1:10 a přidejte jej do 9 ml kapalného média. Toto ředění je ředění 1: 100. Nakonec vytvoříte ředění 1: 1 000 odebráním 1 ml ředění 1: 100 a přidáním 9 ml kapalného média. Pro každé ředění nyní máte 10 ml zředěné bakteriální kultury.
Ředění hotová, na talíře naneste 0,5 ml ředění. Nezapomeňte označit destičky, na které bylo naneseno ředění.
Následujícího dne se vrátíte a uvidíte, že všechny desky mají na sobě několik jednotlivých kolonií. Chcete si vybrat talíř mezi 30 a 300 kolonií. Vidíte, že ředicí destička 1: 1 000 má asi 10 kolonií, což znamená, že jste vzorek naředili více. Tato deska nebude užitečná při hledání CFU.
Ředicí deska 1:10 má mnoho kolonií, možná více než 300. V takovém případě můžete jít na talíř 1: 100. Spočítáte kolonie na této desce a zjistíte, že má 179 kolonií. To znamená, že 0,5 ml ředění 1: 100 obsahuje 179 CFU. Ale co původní vzorek?
Co je to výpočet CFU?
Nyní, když máte nějaké údaje, můžete provést výpočet CFU v původním vzorku.
1. Vezměte nanesené množství (0,5 ml) a vynásobte ředicím faktorem (0,01), čímž získáte 0,005. Musíte to udělat, abyste našli faktor ředění, který vám přinesl počet CFU. Zde vám půl mililitru ředění 1: 100 umožnilo počítat CFU.
2. Vydělte CFU ze zředění (179) výsledkem z kroku 1 (0,005), čímž se získá 35 800 CFU.
To znamená, že původní 1 ml vzorku, který byl naředěn, obsahuje 35 800 CFU. Dalším způsobem, jak to vyjádřit, je říci, že původní vzorek má 35 800 CFU / ml.
CFU je skvělý nástroj pro zjištění, kolik bakterií, hub nebo mikroorganismů je v daném vzorku. Zde popsaná metoda pokovování je zvláště užitečná pro velmi koncentrované vzorky nebo organismy, které nerostou dobře v kapalné kultuře.