Existuje mnoho metod k oddělení a identifikaci různých sloučenin. Chromatografie je věda, která vám umožňuje oddělit složky směsi. The RF (někdy neformálně psaný jako „rf value“) k tomu patří.
Existuje mnoho různých druhů chromatografie. Zde se zaměřujeme na nejjednodušší druh chromatografie: papírovou chromatografii nebo chromatografii na tenké vrstvě (TLC). Oba používají stejný obecný postup, který je popsán níže.
Co zahrnuje chromatografie?
Všechny typy chromatografie mají a stacionární fáze a Mobilní fáze. Stacionární fáze, jak můžete z názvu usoudit, se nepohybuje. V papírové chromatografii je stacionární fází samotný papír.
Aby se zahájilo oddělování sloučenin, je látka, která má být analyzována, tečkovaná na spodním okraji kousku papíru. Poté se papír vloží do kádinky obsahující mobilní fázi, kterou je rozpouštědlo. Rozpouštědlo by mělo být pod místem, kde je látka pro analýzu tečkovaná. Nemělo by to ponořovat analyt.
Kapalina pohybuje kapalinou nahoru papírem. Pokud je analyt nebo jeho část přitahována mobilní fází, bude se pohybovat s ní. Pokud má silnější přitažlivost pro stacionární fázi, nebude se pohybovat.
Poté, co se rozpouštědlo do určité míry posunulo stacionární fází, máte chromatogram. Tento chromatogram vám řekne něco o separaci různých složek ve směsi nebo vám řekne, jakou látku máte. Jak?
Oddělení a identifikace komponent pomocí chromatogramu
Pokud jsou podmínky pro vývoj chromatogramu stejné, měla by se změnit vzdálenost, kterou se konkrétní látka pohybuje. Tato vzdálenost se měří pomocí vzorec retenčního faktoru nebo RF.
Vzorec retenčního faktoru je:
Tato hodnota by měla být stejná pro látku, pokud je chromatogram vyvíjen stejným způsobem.
To je užitečné, pokud máte směs látek.
Řekněme například, že máte čtyři vzorky: Tři jsou standardy a jeden je směs. Vaším úkolem je určit, které komponenty jsou ve směsi.
Co jsou to standardy? Standardy jsou čistým vzorkem látky. To lze spustit na chromatogramu jako srovnání.
Směs může být spuštěna, po které můžete určit, jak daleko běží různé součásti v ní.
Řekněme, že Standard # 1 má silnou afinitu k vodě (mobilní fázi). To znamená, že s mobilní fází pojede papír. Standard č. 2 na druhé straně má silnou afinitu k papíru. To znamená, že zůstane ve stacionární fázi. A konečně, Standard # 3 má afinitu k vodě i papíru. Předpovídáte, že to posune střední částku.
Zjistíte, že se rozpouštědlo pohybuje o 5,7 cm, zatímco Standard # 1 o 0,5 cm, Standard # 2 o 4,8 cm a Standard # 3 o 2,9 cm. Jaké jsou R.F hodnoty pro každý standard?
Nyní znáte R.F hodnoty pro normy. Dále na další kousek papíru umístíte tečku směsi a necháte chromatogram vyvinout umístěním do vody.
Po odstranění zjistíte, že existují dvě tečky, které se oddělily od počáteční tečky, kterou jste umístili. To pravděpodobně znamená, že ve vaší směsi jsou pouze dvě složky. Dále musíte zjistit, kterému ze standardů tyto dvě komponenty odpovídají. Za tímto účelem změříte RF hodnoty.
Rozpouštědlo se pohybovalo 4,5 cm. Jedna složka (nazývaná složka 1) se pohybovala o 2,2 cm a druhá se pohybovala o 3,9 cm (nazývaná složka 2). Chcete-li zjistit, kterému standardu tyto komponenty odpovídají, budete muset k výpočtu R použít vzorec retenčního faktoruF hodnoty.
Vzhledem k těmto RF hodnot, je pravděpodobné, že komponenta 1 odpovídá standardu # 3, protože RF hodnoty jsou velmi podobné. Složka 2 je pravděpodobně standardní # 2.